2004 Fiscal Year Annual Research Report
IgA腎症関連セレクチン遺伝子SNPハプロタイプの白血球接着現象に及ぼす影響
Project/Area Number |
16790477
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Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
Principal Investigator |
武井 卓 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (00366337)
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Keywords | セレクチン / SNP / ハブロタイプ / IgA腎症 |
Research Abstract |
1)Lセレクチンのプロモータ領域5'flanking-642 SNPについて:研究者血液サンプルからDNAを抽出し野生型を得た。ついでIgA腎症に多い変異型を得られた野生型から点変異キットを用いて作成した。これら野生型、変異型のSNPを含むLセレクチンのプロモータ領域の682塩基対と1126塩基対の二つのセグメントを市販のルシフェラーゼレポーターベクターへ組み込み、合計4つのルシフェラーゼレポーターコンストラクトを完成させた。これらから野生型と変異型における発現量の差異をHEK293細胞へ導入しレポーターアッセイを用いて調べた。その結果682塩基対と1126塩基対の二つのセグメントともに野生型と比べて変異型で発現量が低下していていることが認められた(p<0.05)。 2)Lセレクチンのエクソン5,P238SのSNPについて:市販のcDNAよりRT-PCRを用いてLセレクチンを得た。これら全長すべの塩基配列をシークエンスにて確認し野生型を得た。Lセレクチンのエクソン5,712c→T SNP (P238S)対して点変異キットを用いて変異型を作成した。これらから二つの発現コンストラクトを完成させた。 3)Eセレクチンのエクソン9,H468YのSNPについて:市販のcDNAよりRT-PCRを用いてEセレクチンを得た。これら全長すべの塩基配列をシークエンスにて確認し野生型を得た。この野生型は市販のアデノウイルスベクターキットを用いて組換えアデノウイルスベクターを作製した。またEセレクチンエクソン9,1402C→T SNP (H468Y)対して点変異キットを用いて野生型組換えアデノウイルスベクターを用いて変異型の組換えアデノウイルスベクターを作製した。
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