2004 Fiscal Year Annual Research Report
閉塞性黄疸肝の外科侵襲時における活性酵素障害の病態解析
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16790794
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Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
Principal Investigator |
櫻井 丈 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (00339847)
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Keywords | 閉塞性黄疸 / プロテオミクス / ミトコンドリア関連蛋白 / 外科侵襲 |
Research Abstract |
目的:閉塞性黄疸を伴う膵胆道系悪性腫瘍に対して本邦では胆道drainageを施行し、十分な減黄後に根治的手術を施行するという治療方針が一般的である。しかし、十分な減黄には平均6週間以上を要するとの報告もある。閉塞性黄疸肝の外科侵襲に対する脆弱性の病態解析は未だ不充分で,有効な治療薬も開発されていないのが現状である。近年、蛍光標識二次元ディファレンスゲル電気泳動とプロテオミクスにより蛋白を網羅的に解析することが可能となった。今回、閉塞性黄疸ラットを用いて肝細胞内蛋白を網羅的に解析し、閉塞性黄疸の病態を分析した。 方法:8週齢のWister Ratを開腹し総胆管を結紮した。7日後に再開腹し肝臓を摘出した。対照群は単開腹のみを行い、7日後に再開腹し肝臓を摘出した。両群とも再開腹時に採血を行い、血漿中T.Bil, AST, ALT, LDH,γGTP, chEを測定した。摘出した肝臓を肝ミトコンドリア遠心分離後に蛋白を可溶化した。肝ミトコンドリアの分離はSigma mitochondria isolation kitを使用した。両群ともそれぞれCy2,Cy3にて蛍光標識し混合後に二次元ディファレンスゲル電気泳動で分離した。両群の蛋白スポットを解析し有意な増減を認めた蛋白をゲルより切り出し、質量分析計(LS/MS/MS)で蛋白を同定した。 結果:preliminaryの検討では、閉塞性黄疸下で有意に減少した蛋白はubiquinol-cytochrome creductase core protein Iであった。有意に増加した蛋白は2-Cystine peroxiredoxin, haptoglobin precursorであった。今後、ウエスタンブロット、共焦点レーザースキャン顕微鏡などによる蛋白の機能解析を施行する予定である。
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