2018 Fiscal Year Annual Research Report
Structural basis for the regulation mechanism of intracellular polyamine concentration
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16K07270
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
杉山 成 高知大学, 教育研究部自然科学系理工学部門, 教授 (90615428)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ポリアミン / 細胞増殖因子 / 生理活性物質 / アセチル転移酵素 / X線結晶構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、SPD分解過程の1つであるSPDのアセチル転移酵素SATの立体構造とSPDを優先的に取込む分子PotAの立体構造をX線結晶構造解析によって明らかにすることにより、アセチル化転移反応機構とポリアミンの細胞内取り込み機構を解明し、生理活性物質ポリアミンの細胞内濃度調節機構を構造生物学的に解明していくことを目的としている。
PotAは、SPD優先取り込み系のエネルギー供給に関与するATPaseである。N末端側（1～250アミノ酸残基）がATP結合部位を含む触媒部位であり、C末端側（251～378アミノ酸残基）がATPase活性調節部位である。先行研究により、SPDがATPase活性を阻害することが分かっている。このことからSPDの取り込み活性は、ATPaseであるPotAにより調節されていることが示唆される。本研究では、PotAの立体構造を明らかにし、構造学的な知見から取り込み機構を明らかにする。
アポ型PotA、PotA-SPD複合体とセレノメチオニンで標識されたPotAの結晶化実験は、それぞれ針状結晶ながら高品質結晶を取得した。シンクロトロン放射光（SPring-8）を用いて、それぞれの結晶から2.5Aおよび2.7A分解能のX線回折データをそれぞれ得ることに成功した。次に、結晶構造解析における位相問題を解決するため、セレノメチオニンで標識されたPotA結晶を取得しSAD法による解析手段によってPotAの構造解析に成功した。PotAの完全なモデル構築には至っていないものの初期位相から2量体構造は観察できている。現在、これらのPotA結晶構造の精密化が進行中である。
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[Journal Article] Characterization of an aptamer against Runt domain of AML1 (RUNX1) by NMR and mutational analyses2018
Author(s)
①K. Takada, R. Amano, Y. Nomura, Y. Tanaka, S. Sugiyama, T. Nagata, M. Katahira, Y. Nakamura, G. Kawai, T. Kozu, and T. Sakamoto
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Journal Title
FEBS Open Bio.
Volume: 8
Pages: 264-270
DOI
Peer Reviewed
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