2018 Fiscal Year Research-status Report
肝癌細胞株における糖鎖異常と浸潤能との関連性の解析
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16K10561
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
神山 俊哉 北海道大学, 医学研究院, 准教授 (80322816)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西村 紳一郎 北海道大学, 先端生命科学研究院, 教授 (00183898)
島田 慎吾 北海道大学, 大学病院, 医員 (40755576)
若山 顕治 北海道大学, 医学研究院, 客員研究員 (50646544)
武冨 紹信 北海道大学, 医学研究院, 教授 (70363364)
横尾 英樹 北海道大学, 大学病院, 講師 (70399947)
折茂 達也 北海道大学, 医学研究院, 助教 (80711861)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 糖鎖 / 浸潤 / 転移 / 肝細胞癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
癌細胞が発現している糖鎖と癌の悪性度：浸潤能、上皮間葉転換（Epithelial-Mesenchymal Transformation, EMT）との関連性を解明することを目的とした。肝癌細胞株にいて、細胞外マトリックスの破壊に関連するurokinase type plasminogen activator(u-PA)の産生能と糖鎖の関連性を解析した。浸潤能の異なる3種類の肝癌細胞株(HLE、HLF、HepG2)の培養細胞を用いた。各細胞で、u-PAの発現をWestern Blotで評価した。浸潤能の変化を解析した。全自動血清糖鎖プロファイル解析装置により糖鎖の精製と構造解析を行った。その結果、HLEはu-PAの産生が高く、HepG2はu-PAの産生が最も低く、HLFはその中間でであった。浸潤能はu-PA産生能に応じて、HLEは高浸潤能を有し、HLF、HepG2に順であった。u-PA発現あり高浸潤能の肝癌細胞株HLEを用い、u-PAを発現抑制し、それに伴う糖鎖変化するか検討した。浸潤能はu-PA発現に応じて変化し、u-PA発現抑制されたHLEの浸潤能は低かった。HLEとu-PA発現抑制HLEの２つの細胞株における、グライコブロッティング法による糖鎖の網羅的定量解析では全86種類の糖鎖が検出された。高浸潤能肝癌細胞株HLEとu-PA発現抑制HLE間での糖鎖発現の比較では、u-PA発現抑制HLEにおいて14種類の糖鎖が低下していた。
次に浸潤能の異なる2種類の肝癌細胞株(HLE、HepG2)の培養細胞を用い、各細胞で、E-Cadherin、N-Cadherinの発現をWestern Blotで評価した。高浸潤能肝癌細胞株HLEでは、E-Cadherinの発現低下し、低浸潤能HepG2の細胞株は高発現していた。N-Cadherinはともに発現していたが、低浸潤能HepG2の方が高発現していた。高浸潤能肝癌細胞株HLEと低浸潤能HepG2の２つの細胞株における、グライコブロッティング法による糖鎖の網羅的定量解析では全86種類の糖鎖が検出された。HepG2とHLE間での糖鎖発現の比較では、浸潤能の高いHLEにおいて11種類の糖鎖が増加していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
浸潤能、上皮間葉転換（Epithelial-Mesenchymal Transformation, EMT）と特異的糖鎖の発現を検証するために、E-Cadherinの発現を抑制・亢進させ、糖鎖の変化を検討することを目標としていたが、E-Cadherinの発現を抑制・亢進させた肝癌細胞株の作成がおくれているため、これらの細胞株の糖鎖の変化と、浸潤能、上皮間葉転換EMTに関与する特定糖鎖にQuantum dotsを用いた蛍光標識し、癌細胞表面から細胞内部への移行の過程を観察し細胞内でのダイナミクスを評価するが検討出来ていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
浸潤能、上皮間葉転換（Epithelial-Mesenchymal Transformation, EMT）と特異的糖鎖の発現を検証するために、E-Cadherinの発現を抑制・亢進させ、糖鎖の変化を検討することを目標としていたが、E-Cadherinの発現を抑制・亢進させた肝癌細胞株の作成することと、これらの細胞株の糖鎖の変化と、浸潤能、上皮間葉転換EMTに関与する特定糖鎖にQuantum dotsを用いた蛍光標識し、癌細胞表面から細胞内部への移行の過程を観察し細胞内でのダイナミクスを評価するが検討する。
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| Causes of Carryover |
E-Cadherinの発現を抑制・亢進させた肝癌細胞株の作成が行う。さらに、これらの細胞株の糖鎖の変化と、浸潤能、上皮間葉転換EMTに関与する特定糖鎖にQuantum dotsを用いた蛍光標識し、癌細胞表面から細胞内部への移行の過程を観察し細胞内でのダイナミクスを評価するが検討する。
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Research Products
(1 results)
