16SrRNA解析を応用した高齢者の低栄養起因口腔・腸内細菌叢の網羅的探索

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K11590
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 水口 真実 岡山大学, 大学病院, 助教 (20634489)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 窪木 拓男 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (00225195) ; 大野 彩 (木村彩) 岡山大学, 大学病院, 助教 (20584626) ; 大野 充昭 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (60613156)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 要介護高齢者 / 低栄養 / 口腔内細菌叢 / 腸内細菌叢 / メタゲノム解析 / 16SRNA解析

Outline of Annual Research Achievements

平成28年度は，倫理審査委員会に研究計画書を提出し承認を得たうえで，研究協力を得た老人保健施設に入所中の要介護高齢者から，低栄養高齢者および対照群として栄養良好高齢者の抽出を行った．低栄養高齢者の選択基準は，BMI＜18.5，血清アルブミン値≦3.5g/dl，過去6ヶ月間に3％以上の体重減少または，2～3kgの体重減少が認められること，急性疾患を有さず，過去1ヶ月以内に抗菌薬投与を受けていないこと，常食を経口摂取していること，過去3ヶ月に食事の摂取量が著しく減少していないこととした．
そして，低栄養高齢者7名，栄養良好高齢者11名に対して，あらかじめ決めていた臨床診査プロトコールに従い臨床診査データを収集した．その結果，低栄養群7名は平均年齢82.7歳，男性1名，女性6名，平均BMI値は17.1であり，食形態は常食3名，きざみ食2名，ミキサー食1名，経管栄養1名であった．一方，栄養良好群11名は，平均年齢87.6歳，男性1名，女性10名，平均BMI値は22.4で，食形態は常食5名，きざみ食4名，ミキサー食2名であった．
これらの対象者の自然唾液および便を採取するため，検体採取プロトコールの設定（得られた臨床検体は，細菌叢構成の維持のため，迅速に嫌気パックを行い，グリセロール・ストックによる凍結保存を行う．自然唾液の採取は朝食後2時間経過後，口腔ケアからも2時間経過後に統一する．）および採取キットの準備を行った．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成28年度は，研究計画の倫理委員会承認を得ること，対象者20名を抽出し臨床診査および検体採取を行う計画であった．
このうち，低栄養高齢者 7名，栄養良好高齢者11名の臨床診査は達成できている．また，臨床診査未実施の対象を4名確保しており，対象者20名は達成できる見込みである．検体の採取がまだ実施できていないが，検体採取プロトコールの設定やキットの準備は完了しており，すぐに検体採取に着手できるため，概ね順調に進展していると考えている．

Strategy for Future Research Activity

1.対象の自然唾液および便をプロトコールに従って採取する．
2.次世代シークエンサーを用いた16SrRNA解析にて，自然唾液および便中の細菌叢を網羅的に解析する．その結果を基に，細菌叢系統的比較解析（UniFrac法）を行い，低栄養高齢者と栄養良好高齢者の腸内細菌叢構成の差異（UniFrac距離）を確認する．さらに，細菌叢を構成する各属，各門の構成比率を算出し，低栄養高齢者の腸内細菌叢に有意に，より優勢な菌属を明らかにする．
3.低栄養／栄養良好高齢者を追跡し，自然唾液および便を採取し，臨床診査を行う．そして，2と同様の方法で口腔内・腸内細菌叢の解析を行い，経時的変化を把握する．

Causes of Carryover

28年度に予定していた検体採取に至らず、次世代シークエンサーの委託解析料が使用されなかったため．

Expenditure Plan for Carryover Budget

28年度に設定した検体採取プロトコロールに従い、検体採取を行う．これら検体を業者に委託する費用が必要である．