2017 Fiscal Year Research-status Report
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16K20415
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| Research Institution | Matsumoto Dental University |
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Principal Investigator |
塩屋 幸樹 松本歯科大学, 歯学部, 助教 (40727632)
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2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 侵襲性歯周炎 / ロイコトキシン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
侵襲性歯周炎の発症に関与するAggregatibacter actinomycetemcomitansは、外毒素であるロイコトキシン(LtxA)を産生する。LtxA高生産株(JP2株)により重篤な症状が引き起こされることから、LtxAの性質とその病原性の関連性の解析を行った。前年度にTLR4欠損マウス由来の骨芽細胞と骨髄細胞の共存培養系に精製LtxAを添加することで、LtxA濃度依存的な破骨細胞への分化が確認された。そこで、本年度は熱処理LtxAを用いた破骨細胞の分化との比較実験を行った結果、熱処理LtxAによる破骨細胞形成が有為に減少した。このことよりLtxAが破骨細胞への分化に関わることが示唆された。次に、LtxAによる骨髄細胞から破骨細胞への影響を調べるため、TLR4欠損マウス由来の骨髄細胞に精製LtxAを添加し、破骨細胞の分化を評価した。現在は最適な濃度や細胞数などの条件検討を行っている。また、LtxAの作用機序を解析するため、LtxAの高次元構造解析を試みた。昨年に引き続き結晶化の条件検討を行ったが、結晶を得ることが出来なかった。そこで、LtxAの構造安定性を調べた結果、構造安定性にカルシウムが重要であること、精製過程中に自己分解が行われることが判明した。このことにより全長での解析が困難である判断し、ドメイン毎での構造解析を行うことにした。現在は、各ドメインでの発現・精製を行っている最中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
1. TLR4欠損マウス由来の骨芽細胞と骨髄細胞の共存培養系に精製LtxAを添加することで、熱処理LtxAによる破骨細胞分化と比較し、有為に破骨細胞数の増加がみられた。
2. LtxAを用いてX線構造解析のための、結晶化の条件検討を行ったが、X線構造解析に使用可能なLtxAの取得には至らなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度は引き続きLtxAによる骨吸収活性解析とLPSの影響を解析して行く予定である。また、マクロファージや骨髄細胞へのLtxAの影響も評価する予定である。LtxA全長の高次元構造解析が困難なため、ドメイン毎に精製し構造解析を行う予定である。また、LtxAの受容体であるLFA-1との相互作用解析も行う予定である。
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