アメロブラスチン合成ペプチドによる新規骨治療薬の開発

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17390486
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 高田 隆 Hiroshima University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (10154783)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮内 睦美 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (50169265) ; 工藤 保誠 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (50314753) ; 小川 郁子 広島大学, 病院, 講師 (70136092) ; 北川 雅恵 広島大学, 病院, 助教 (10403627)
• Keywords: 骨 / 再生 / エナメル蛋白 / アメロブラスチン / ペプチド / 担体 / 骨折 / レセプター

Research Abstract

アメロブラスチを新規骨治癒促進薬として用いることができるかどうかを検討する目的で研究を遂行した結果,以下の成果を得た.
1.アメロブラスチンペプチド(AMB-16N)ならびに同ペプチドの分解をおさえたAMB-16MGを複合したコラーゲンスポンジあるいはPGAの骨治癒促進効果を骨欠損モデルにて検討したところ,対照群に比較して明らかな治癒効果が見られた.この治癒効果は,micro-CTによる解析でも明らかであった.
2.アメロブラスチン合成ペプチドをコードするDNA断片を組み込んだプラスミドをコラーゲンスポンジに複合して骨折モデルに投与したところ,対照群に比べて骨治癒促進効果がみられたが,DNAを大量に準備することには技術的にも経済的にも困難であることが判明したので,プラスミドの濃度を上げての検討は断念した.
3.TAP標識ベクターを用いてAMB-16Nを発現する骨芽細胞ステーブルクローンを作製し,16N結合蛋白(受容体)を同定することを検討したが成功しなかった.そこで,再度,pFLAG-CMV-3ベクターを用いてAMB-16Nを発現する細胞の抽出物からFLAG抗体で受容体を得ることを試みた.その結果,対照には見られない特異的バンドが観察された.そのうち2つについては質量分析により,Myosin IcとTropomyosin 1 alpha chainであることが明らかとなり,石灰化能との関連が注目された.
4,今年度の検討の中で,アメロブラスチンを高発現するヒト由来細胞を見つけた.この細胞から分泌されるアメロブラスチンにはヒト型の糖鎖修飾がなされている可能性が高く,合成AMB-16Nより高い骨再生促進能を有する可能性があるシーズとして検討を継続している.