2005 Fiscal Year Annual Research Report
RNA干渉経路とは異るコサプレッションに特有の遺伝子発現抑制経路に関する研究
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17570030
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
児玉 浩明 千葉大学, 園芸学部, 助教授 (70302536)
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| Keywords | RNAサイレンシング / 脂肪酸不飽和化酵素 / α-リノレン酸 / スプライシング |
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| Research Abstract |
タバコ小胞体局在型リノレン酸合成酵素遺伝子(NtFAD3)を導入した形質転換タバコでは、ほとんどの場合、野生型タバコよりもリノレン酸含量が大幅に増加する。しかし、S44と名付けた系統では、大幅にリノレン酸含量が低下した。このS44株で観察されるジーンサイレンシングでは、導入したNtFAD3遺伝子から転写されたmRNAは蓄積し、内在性のNtFAD3遺伝子から転写されたmRNAはスプライシングの異常により、ミススプライスされた産物として蓄積している。そこで、in vivo splicingアッセイにより、実際にS44株においてスプライシング阻害が生じているかどうか調べた。その結果、野生株のタバコでは観察されるmatureな転写産物の形成が、S44株では認められないことが明らかになった。このようなスプライシングの阻害は、NtFAD3遺伝子のRNAi株では観察されないことから。コサプレッションにおいてはスプライシングの阻害が内在性の遺伝子の発現抑制に関与していることが明らかになった。またS44株に再度NtFAD3過剰発現コンストラクトを導入したところ、表現型が過剰発現に戻ったrevertantが得られた。このrevertantは、単純なS44株の再分化過程では観察されないことから、導入した遺伝子とS44のコサプレッションを引き起す遺伝子座との間で何らかの相互作用が生じていることが原因と考えられた。次に、このrevertant株においてノーザン解析によりNtFAD3遺伝子の発現を観察したところ、S44株でのNtFAD3 mRNAの蓄積よりもむしろ低下していることが明らかになった。このことは、特定のmRNA種の過剰発現がジーンサイレンシングを引き起すとする閾値説を支持するものと考えられた。
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Research Products
(1 results)
