ウィルソン病等における血中セルロプラスミン分子の構造解析

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17591125
• Research Institution: Kurume University
• Principal Investigator: 渡邊 順子 Kurume University, 医学部, 講師 (40258489)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 芳野 信 久留米大学, 医学部, 教授 (40080569) ; 原田 英明 久留米大学, 医学部, 助教 (90309790)
• Keywords: セルロプラスミン / ペプチド解析 / 低セルロプラスミン血症 / ウィルソン病 / 質量分析

Research Abstract

低セルロプラスミン血症および健常者由来の血清から分離したセルロプラスミン複合物を用い,二次元電気泳動を行った。低セルロプラスミン血症で確認されたナンセンス変異による低分子のペプチドがゲルイメージ上の相違として確認できることを予測したが,両者の比較の結果,違いは認めなかった。またセルロプラスミンの低値を認めるがセルロプラスミンの遺伝子異常ではないウィルソン病患者の検体でも同様の比較を行ったが同じく,健常者のゲルイメージとの相違は認めなかった。次に,各々の血清を二次元電気泳動後のゲルから該当するバンドを抽出しMALDI-TOF-MS解析をおこなったが,それぞれの疾患に特異的な質量を示す分画は認めなかった。少なくとも低セルロプラスミン血症では遺伝子レベルでナンセンス変異を同定されているにもかかわらず,MALDI-TOF-MS解析でのペプチド構造解析では異常が認められなかった。これは,純品のペプチドピークの検出率が19%にとどまったことから変異部位がペプチドピークとして検出されなかった故と考えられた。また,遺伝子レベルでの変異を確認できていないもう一方のアレルでの変異を蛋白レベルで同定することもできなかった。ウィルソン病では,糖鎖付加の変化などの翻訳後修飾によるゲルイメージおよびペプチドピークの変化を予測したが実際には変化を認めなかった。この原因として,ウィルソン病では翻訳後修飾を受けていないまたはペプチドピークの検出範囲には変化が存在しなかった可能性を考える。
ヒト由来のセルロプラスミン純品試薬のペプチドピークの検出率が19%であることから,変異部位または異なる修飾を受ける部位がこの範囲にない場合には,MALDI-TOF-MSでは変異蛋白または異常蛋白と正常蛋白との差が有意に検出するには限界があると考えられた。

Research Products

• [Journal Article] Paternal transmission and slow elimination of mutant allelesassociated with late-onset ornithine transcarbamylase deficiencyin male patients (2008)
  • Author(s): Numata S, Harada E, Maeno Y, Ueki I, Watanabe Y, Fujii C, Yanagawa T, Takenaka S, Inoue T, Inoue S, Goushi T, Yasutake T, Mizuta T, Ybshino M
  • Journal Title: J Hum Genet 53 Pages: 10-17
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Roles of specific cytokines in bone remodeling and hematopoiesis in Gaucher disease (2007)
  • Author(s): Yoshino M, Watanabe Y, Tokunaga Y, Harada E, Fujii C, Numata S, Harada M, Tajima A, Ida H
  • Journal Title: Pediatr Int 49 Pages: 959-965
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Novel mutations in five Japanese patients with 3-methylcrotonyl-CoAcarboxylase deficiency (2007)
  • Author(s): Uematsu M, Sakamoto O, Sugawara N, Kumagai N, Morimoto T, Yamaguchi S, Hasegawa Y, Kobayashi H, Ihara K, Yoshino M, Watanabe Y, Inokuchi T, Yokoyama T, Kiwaki K, Nakamura K, Endo F, Tsuchja S, Ohura T
  • Journal Title: J Hum Genet 52 Pages: 1040-1043
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Screening for Alagille syndrome mutations in the JAGl andNOTCH2 genes using denaturing high-performance liquidchromatography (2007)
  • Author(s): Samejima H, Torii C, Kosaki R, Kurosawa K, Yoshihashi H, Muroya K, Okamoto N, Watanabe Y, Kosho T, Kubota M, Matsuda O, Goto M, Izumi K, Takahashi T, Kosaki K
  • Journal Title: Genet Test 11 Pages: 216-227
  • Peer Reviewed