2005 Fiscal Year Annual Research Report

TRP-2遺伝子抑制によるメラノーマ放射線治療効果増強の基礎研究

Research Project

Project/Area Number	17591301
Research Institution	Kobe Gakuin University
Principal Investigator	近藤浩文神戸学院大学, 薬学部, 研究員 (20399132)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	福森義信神戸学院大学, 薬学部, 教授 (60102927) 平塚純一川崎医科大学, 放射線医学(治療), 助教授 (30192298)
Keywords	放射線 / X線 / 粒子線 / 遺伝子 / 癌 / 発現制御 / 抵抗性 / 治療
Research Abstract	【研究の目的】メラノーマ細胞に特異発現し、その放射線抵抗性に関与すると考えられているTRP-2遺伝子の発現を抑制することによって、メラノーマ細胞の放射線抵抗性・DNA障害型化学療法剤への抵抗性を減弱させることの可能性を検証する第一段階として培養癌細胞レベルを実施し、「ブラックデビル」と恐れられているメラノーマに対する粒子線・放射線・化学療法等の治療効果増強法(増強剤)開発に結びつけることを目的とした。【研究実績】研究実施計画に基づき以下の研究を実施した。本年度は、各種基盤評価技術の確立と検討する対照となる細胞系の確立に重点をおいた。 (1)各種悪性黒色腫細胞を用いてTRP-2発現抑制法を検討した。発現抑制手法としてはsiRNA発現プラスミドの細胞への導入発現法を採用した。Tyrosinase遺伝子発現欠損黒色腫細胞にTRP-2発現抑制siRNA発現プラスミドを導入した安定細胞株を作製した。現在細胞の分子生物学的・生化学的性質を検討中である。 (2)TRP-2遺伝子発現抑制による殺腫瘍細胞効果評価系の確立するため、X線に対する感受性評価系、紫外線に対する感受性評価系、およびDNA障害型抗癌剤であるシスプラチン系抗癌剤に対する感受性の評価系を確立した。 (3)TRP-2遺伝子の発現抑制による放射線感受性変化の機序を解明するため、TRP-2蛋白質の持つ酵素活性であるDOPAchrome tautomerase活性により産生されるメラニンモノマーに関し、TRP-2遺伝子発現量・黒色腫細胞内メラニンモノマー量と放射線感受性の相関を知るため、HPLCを用いたメラニンモノマー定量系を確立した。TRP-2遺伝子発現と遺伝子修復能・細胞周期との関連が示唆されているので、フローサイトメーターを用いた細胞周期と遺伝子修復に関連する蛋白質発現およびTRP-2遺伝子発現の相関評価法を検討した。さらに各種細胞内シグナル伝達系のアッセイ法も検討中である。