血清プロテオミクス解析によるGVHDの早期診断法の確立

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17790713
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 堀 司 札幌医科大学, 医学部, 助手 (20398324)
• Keywords: GVHD / proteomics

Research Abstract

1.GVHDマウスモデルの作製と病態推移の把握
donorをC57BL/6、recipientをBALB/cとし、8.5Gyの全身放射線照射後の骨髄細胞2x10^7個を輸注し、GVHDモデルとした。移植後day7、day14、day21、day28の症状と肝、消化管、皮膚の病理組織の変化を経時的に把握し、病理組織所見はスコア化した。症状、病理組織ともにday7以降GVHD所見を呈した。
2.モデルマウスの血清プロテオミクス解析
移植前、day7、day14、day21、day28に血清採取し、前処理後にSELDI-TOF-MSにて網羅的解析を行った。これらの結果をクロスバリデーション法により検討したところ、GVHD群(day7、day14、day21、day28)とコントロール群(移植前)との分類に有用なpeakが得られた。このpeakはGVHDモデルでday7以降有意な上昇を認めており、病理組織スコアが最高値に達する以前から高いpeak intensityを呈していた。なお、GVHDを発症しないsyngeneicの移植においては有意な変化を認めなかった。また、免疫抑制剤による治療を行ったGVHDモデルにおいては、投与後に症状の軽減とともに有意なpeakの低下が認められた。以上より、このpeakは早期診断、治療効果判定ともに利用できる可能性が示唆され、病態マーカーのcandidateとした。
3.candidateの同定
現在、このcandidateをimmunochromatography、RP-HPLC等を用いて分離精製中であり、分離後はLC-MS/MSの後のdatabase検索、PMF法、さらにprotein sequenceを用いて同定する予定である。