2020 Fiscal Year Annual Research Report
Simultaneous production of monoclonal antibodies against multiple membrane proteins and their evaluations for the applications to therapeutic medicines
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17H03468
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
冨田 昌弘 三重大学, 工学研究科, 特任教授(研究担当) (20183494)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中野 秀雄 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (00237348)
安川 智之 兵庫県立大学, 物質理学研究科, 教授 (40361167)
湊元 幹太 三重大学, 工学研究科, 教授 (80362359)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 立体構造認識モノクローナル抗体 / 誘電泳動 / 無細胞発現系 / プロテオリポソーム / 分子標的治療薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. SST (立体構造特異的ターゲティング)法の受容体への応用成功を受け、さらに、可溶性タンパク質への応用を検討した。その目的のため、可溶性タンパク質に膜結合領域を導入した組換えプラスミドベクターを構築し、CHO-K1細胞へのトランスフェクションを試みた。その結果、目的の可溶性タンパク質を膜上に発現する組換えCHO 細胞の取得を確認した。
2. 単一B細胞から，直接モノクローナル抗体(mAb)を取得する新規法であるEcobody法を用いて，EGFRなどの立体構造認識ウサギmAbの取得を行った。得られたmAbはEGFRに結合し、A431細胞を免疫染色で強く染めることがわかったが、アゴニストおよびアンタゴニスト活性は有していないことがわかった。またEcobody法技術向上をめざし，Swine Influenza Virus をモデルとして，より効率的にウサギmAbを取得できる条件を探索し、取得したmAbを用いてサンドイッチELISAの測定系を構築した。
3. 誘電泳動を利用してマイクロウェルアレイ内に免疫化マウスB細胞とミエローマ細胞のペアを数分と高速で形成できた。パルス法を用いることによりこの細胞ペアの電気細胞融合を行った。マイクロウェルアレイ内に免疫化マウスの脾臓から取得したB細胞アレイを作製し，産生される抗体を細胞表層に濃縮・捕捉することにより標的抗体を産生する細胞の識別を行った。さらに，その標的抗体産生細胞をウェルから選択的に回収できた。
4. 今年度も引き続き、マイクロビーズ担持人工脂質膜へ組換え膜タンパク質GPCR（ヒトアドレナリンβ2受容体、ヒトコルチコトロピン受容体）を提示するためのバキュロウイルス出芽粒子膜融合方法の検討を進めた。異なるGPCRに試験を広げ、適切な抗体との組合せのときのみ特異的検出が起こることを観察し精度を高めた。本手法による担持膜の流動性に対する影響を調べウイルス融合が担持膜の流動性を高めていることが分かった。
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| Research Progress Status |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Optimization of stereospecific targeting technique for selective production of monoclonal antibodies against native ephrin type-A receptor 22020
Author(s)
Yasuhiro Yamasaki, Chiho Miyamae, Yushi Isozaki, Keisuke Ichikawa, Yoshiki Kaneko, Yasuyuki Oda, Takashi Murayama, Takashi Sakurai, Katsuyuki Tamai, Kanta Tsumoto, Masahiro Tomita
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Journal Title
Journal of Immunological Methods
Volume: 484-485
Pages: 112813(1-9)
DOI
Peer Reviewed
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