2017 Fiscal Year Annual Research Report
Establishment of smart-diagnosis&treatment for canine tumor by exosome
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17H03926
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
三浦 直樹 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (80508036)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡本 芳晴 鳥取大学, 農学部, 教授 (50194410)
福島 隆治 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (10466922)
中川 貴之 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 准教授 (40447363)
畑井 仁 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 准教授 (40566535)
後藤 章暢 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (70283885)
丸山 征郎 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任教授 (20082282)
原田 陽一郎 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任准教授 (80464147)
川原 幸一 大阪工業大学, 工学部, 教授 (10381170)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | エクソソーム / マイクロRNA / ノンコーディングRNA / 腫瘍 / イヌ / メラノーマ / 肝細胞癌 / 乳腺腫瘍 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の一つ目の目標は腫瘍特異的エクソソームを確認することである．腫瘍特異的エクソソームが同定されれば，含有smallRNAの解析により，本申請研究のゴールであるスマートな診断・治療戦略が確立できる．
研究計画の初年度である平成29年度は当初の目的であるエクソソームの抽出方法を検討した．その結果，安定して抽出でき，抽出分子の大きさの解析でもエクソソーム分画の抽出を確認できた．抽出は正常なイヌの血液、腫瘍罹患イヌの血液、メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した。次に，エクソソーム表面マーカーのスクリーニングの条件を調整検討した．その結果，抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した．今後、スクリーニングした結果を再度，解析予定である．さらに，エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析にイルミナ社のHi-Seqシーケンサで行った．今回は培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子のプロファイルを確認することができた．次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う。
次に研究では細胞株で発見できた新規のsmall RNA（特にマイクロRNAを中心）の新規腫瘍関連分子として位置づけて解析を行い，腫瘍発生・転移メカニズムを解析する.
平成29年度はエクソソームに含有される複数のマイクロRNAの発現をリアルタイムPCRで確認できた．特に確認できたメラノーマサンプル間での発現の変化を確認した．イヌの腫瘍サンプル，メラノーマ腫瘍細胞株，細胞株上清のエクソソームの比較で，含有マイクロRNAの比率に変化があることを確認し，エクソソームへの選択的なマイクロRNAの濃縮が確認された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画の初年度の目的であるエクソソームの抽出を行えた．抽出は正常なイヌの血液，腫瘍罹患イヌの血液，メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した.
エクソソーム表面マーカーのスクリーニングを行えた．抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した．翌年解析予定．
エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析を行った．培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子を次世代シーケンスでシーケンスを読みとった．次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う．
ターゲットとするマイクロRNAの遺伝子導入は行えていない．現在，試薬など検討中.
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| Strategy for Future Research Activity |
初年度のスクリーニング解析はおおむね順調に進んでいる.今後はそのスクリーニングの結果を確認する．確認は各ターゲットとなるsmall RNA分子のリアルタイムPCR等にて行う．同時に表面マーカーに関しては特異的な検出方法を検討する．さらに，細胞株で行っている実験により発見できたマーカー分子を臨床例で確認する.
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Research Products
(6 results)
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[Journal Article] Aberrant expression of microRNAs and the miR-1/MET pathway in canine hepatocellular carcinoma2018
Author(s)
Lai YC, Ushio N, Rahman MM, Katanoda Y, Ogihara K, Naya Y, Moriyama A, Iwanaga T, Saitoh Y, Sogawa T, Sunaga T, Momoi Y, Izumi H, Miyoshi N, Endo Y, Fujiki M, Kawaguchi H, Miura N.
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Journal Title
Vet Comp Oncol.
Volume: in press
Pages: 0
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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