2019 Fiscal Year Annual Research Report
脊椎の発生・維持・変性の分子機序解明を目指した統合的研究
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17H04311
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
筑田 博隆 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (30345219)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 栄 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (50282661)
大島 寧 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (50570016)
松林 嘉孝 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (50747962)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 整形外科学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
東京大学医学部整形外科ではマウス変形性腰椎症モデルの開発をおこなってきた。申請者らは、これまで四肢骨格形成や変形性膝関節症の研究で培ってきた技術と経験を基に、脊椎の各組織の発現解析を行い、組織特異的Creマウスや初代細胞培養法など脊椎基礎研究に必要な基盤技術を開発した上で、脊椎の形成、維持、変性を一元的に理解するための統合的研究を計画した。まずレーザーマイクロダイセクションなどを用いた脊椎の発現解析として、硬組織からLMDにて微小組織サンプルを回収し、mRNAを逆転写、増幅してRNAシーケンスを行う手法を転用した（Biomed Res. 35:263-70, 2014）。まず切片作成に十分な大きさとなるE10.5-11.5から、骨格成長が落ち着く生後8wまでのマウスサンプルを時系列に採取し、固定なしに専用コンパウンドに包埋して液体窒素内で急速凍結させ、川本法に準じて凍結切片を作成したのち、LMDによって各段階の線維輪、髄核、周囲靭帯を切り取った。回収されたサンプルからmRNAを回収し、逆転写、増幅を行ったのちにRNAシーケンスを行い、遺伝子群の発現量とその変化を詳細に解析した。発現遺伝子についてパスウェイ解析を行い、それぞれの組織で重要な役割を果たすであろうシグナル経路の候補を複数得たが、特にTGF-betaに関する動きが大きいことが分かった。
また特徴的な発現パターンを示す遺伝子のうち、椎間板線維輪の内側に特異的に発現する遺伝子についてはタモキシフェン誘導性のCreマウスを樹立し、Rosa26-tdTomatoと交配させてトラッキングを行ったところ、椎間板線維輪周辺のprogenitorと思われる細胞群を標識することができた。現在このマウスを用いて詳細にセルトラッキングを行うとともに、その細胞の特性について解析を行っている。
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| Research Progress Status |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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