2019 Fiscal Year Annual Research Report
透過性細胞を用いた複製および転写におけるクロマチンダイナミクスの解析
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17H05013
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| Research Institution | Japanese Foundation for Cancer Research |
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Principal Investigator |
立和名 博昭 公益財団法人がん研究会, がん研究所 がん生物部, 研究員 (70546382)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | クロマチン / ヒストン / エピジェネティクス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究により、ヒストン複合体がクロマチンに取り込まれる機構を解析するRhIPアッセイを確立することに成功した。RhIPアッセイは透過性細胞のクロマチンに外から加えたヒストン複合体を取り込ませる実験系である。そのためヒストンの取り込みがどのクロマチン領域において起きたのかを解析することができる。さらに、細胞周期を同期させることにより、いつヒストンがクロマチンに取り込まれたのかを解析することが可能である。
これまでにH2A-H2B、H2A.X-H2BおよびH2A.Z-H2B複合体のクロマチンへの取り込み機構をRhIPアッセイとChIP-seqを組み合わせゲノムワイドに解析を行なった。その結果、これらのヒストン複合体は細胞周期に関係なく弛緩したユークロマチンに取り込まれることが明らかとなった。凝集度の高いヘテロクロマチンはDNA複製に共役した機構でのみヒストンの取り込みが起こることを見出した。これらのことから、クロマチン構造に依存してヒストンの取り込みが起こることが明らかとなった。またH2A-H2BとH2A.X-H2B複合体は複製依存的および非依存的どちらでもクロマチンへ取り込まれ、これらはクロマチンへの取り込みにおいては区別されていないことが分かった。一方でH2A.Zは複製依存的にクロマチンに取り込まれることなく、複製非依存的にのみユークロマチンに取り込まれることが明らかとなった。さらに、H2A.Zは転写開始点周辺のクロマチンに特異的に取り込まれることが分かった。変異体を用いた解析を行い複製依存的なヒストンのクロマチンへの取り込みに必要なアミノ酸の同定にも成功した。
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| Research Progress Status |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
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