2017 Fiscal Year Annual Research Report
オープンクロマチン構造を特異性高くイメージングできる技術の開発
Project/Area Number |
17J05901
|
Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
垣塚 太志 大阪大学, 生命機能研究科, 特別研究員(DC2)
|
Project Period (FY) |
2017-04-26 – 2019-03-31
|
Keywords | クロマチン / イメージング |
Outline of Annual Research Achievements |
ゲノム DNA はクロマチンとして折り畳まれ、直径数 μm の核内にコンパクトに収納されている。立体的なクロマチン高次構造は、転写などの核内現象と密接に関与している。三次元の核内空間におけるクロマチン高次構造を解析するために、本研究課題では、細胞核内のオープンクロマチン構造を特異的にイメージングできる技術の確立を目指す。 本研究で開発した蛍光プローブを培養細胞と反応させると、細胞核特異的な染色が確認される。さらに、その核内における染色パターンを詳細に解析すると、ヘテロクロマチン領域の蛍光輝度が、その他の核質領域の輝度に比べ、顕著に減少していることが分かった。そこで、このヘテロクロマチン領域における輝度減少が、クロマチン構造を反映した結果であることをより厳密に確かめるために、クロマチン構造に対する人工的な摂動を与えた。具体的には、メジャーサテライト領域特異的にアセチル化を付加する事で、通常ヘテロクロマチンであるゲノム領域に、オープンクロマチン構造を人為的に誘導した。すると、摂動を与えていない場合と比べ、メジャーサテライト領域における蛍光シグナルが顕著に上昇した。この結果から、本染色法がクロマチン構造を反映することを確認できた。 また、本研究で開発した蛍光プローブが結合したゲノム領域を次世代シーケンサーを用いて解析したところ、既知のオープンクロマチン領域に対する高い特異性を確認する事ができた。 以上の結果より、本研究で開発した蛍光プローブが、オープンクロマチン構造特異的な染色を実現できることを実証できた。現在は、本蛍光プローブを用いて、核内現象の詳細な解析を行うための実験準備に移っている。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は、クロマチン構造に対する人為的摂動実験や次世代シーケンサー解析などによって、オープンクロマチンを特異的に染色するためのコンセプトを、効果的に実証する事ができた。
|
Strategy for Future Research Activity |
今後は、本研究課題で開発した蛍光プローブを用いることで、核内におけるオープンクロマチン構造の局在と、転写制御などの核内現象との相関の解析を行う。また、本蛍光プローブのクロマチン構造特異性をコントロールしうる要素の解析も同時に行う。
|
Research Products
(1 results)