2017 Fiscal Year Research-status Report
ストレス性痛覚過敏－下行性疼痛調節系の機能変化とエピジェネティクスの関与―
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17K09038
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
井辺 弘樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60326353)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 晃久 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (20225022)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ストレス / 痛覚過敏 / 下行性疼痛調節系 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．慢性ストレス後の下行性疼痛調節系やその活動をコントロールする高位中枢の活動変化を調査するため、コントロール、強制水泳ストレス負荷ラットの足底に CFA を注射し、疼痛反応を測定した。強制水泳ストレス負荷により、 CFA 注射による疼痛反応の有意な増加が確認された。さらに、CFA 注射により島皮質および前帯状皮質において、pCREB、 Egr-1 の増加が確認されたが、CFA 注射より前に、強制水泳ストレスを負荷すると、CFA 注射による島皮質および前帯状皮質における pCREB、 Egr-1 の増加が減弱することが明らかとなった。これら結果は、関連する学会で報告され、国際雑誌に論文として掲載された。
２．慢性ストレス後の下行性疼痛調節系やその活動をコントロールする高位中枢でのエピジェネティクスの関与を調査するため、コントロール、慢性ストレス負荷ラットの下行性疼痛調節系やその活動をコントロールする高位中枢において、acetyl Histone H3、MeCP2 の発現を調査した。また、これらの変化がどのような細胞で生じているか調べるために、5HT や GABA と二重染色を行った。現在、データーの解析中である。
３．慢性ストレス後の下行性疼痛調節系におけるグリアを含む組織構築の変化を明らかにするため、慢性ストレス負荷後、シナプス関連タンパク質( PSD95 )、転写調節関連タンパク質 ( acetyl-Histone H3 、MeCP2、pMeCP2 ) などの Western blot を行った。現在、データーの解析中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
強制水泳ストレスを負荷すると、CFA 注射による炎症性疼痛は増強し、島皮質および前帯状皮質における pCREB、 Egr-1 の増加が減弱することが明らかとなった。これら結果は、関連する学会で報告され、国際雑誌に論文として掲載された。計画はおおむね順調に進展していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
１．RatTph2 遺伝子断片（もしくはスクランブル配列）を含む short hairpin RNA (shRNA) プラスミドをエレクトロポレーション法を用いてラットの吻側延髄腹内側部（RVM）に遺伝子導入を行い、TPH の発現変化を検討する。
２．慢性ストレス後の下行性疼痛調節系やその活動をコントロールする高位中枢でのエピジェネティクスの関与を調査するため、引き続き、コントロール、慢性ストレス負荷ラットの下行性疼痛調節系やその活動をコントロールする高位中枢において、acetyl Histone H3、MeCP2、pCREB、c-Fos、delta-FosB などの発現を調査する。また、これらの変化がどのような細胞で生じているか調べるために、5HTやGABAなどと二重染色を行う。
３、慢性ストレス後の下行性疼痛調節系における組織構築の変化やエピジェネティクスの変化を調査するため、慢性ストレス負荷後、脳を摘出し、シナプス関連タンパク質( PSD95 )、転写調節関連タンパク質 ( acetyl-Histone H3、MeCP2、DNMT ) などの Western blot を行う。有意差が確認されたタンパク質に対しては免疫組織染色を行い、画像上どの領域で変化が著明であるのか、組織学的検討を行う。さらに、ヒストンのアセチル化と DNA のメチル化は解析 Kit を用いて調査する。
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| Causes of Carryover |
当該年度に実施予定の実験の一部を行うことが出来なかったため、抗体や実験動物などの購入費用に余りが生じたため。
western blot、免疫組織染色等に用いる抗体や実験動物などの購入に使用する予定である。
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