2017 Fiscal Year Research-status Report
Molecular Mechanisms of Hepatitis B virus cccDNA Formation
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17K09412
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
喜多村 晃一 金沢大学, 医学系, 講師 (70378892)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | B型肝炎ウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
B型肝炎ウイルス（HBV）持続感染者は国内で130～150万人と推定されており、感染を放置すれば慢性肝炎、肝硬変、肝がんへと進行するおそれがある。HBV持続感染では、cccDNAと呼ばれる環状ウイルスDNAが、宿主細胞の核内に維持されウイルス複製の鋳型となる。cccDNAを除去する有効な治療法は無く、B型肝炎の根治が難しい理由となっているが、現在のところcccDNAを標的とする分子機構の知見は極めて少ない。本研究では、HBV cccDNAの形成・維持に関わる新たな宿主因子の同定及び分子機構について解析を行い、B型肝炎克服への手がかりを得ることを目指している。本年度は、cccDNA形成に関わると推定している宿主因子であるFEN1タンパク質について、その作用の解析を主に進めた。これまでCRISPR-Cas9によるFEN1ノックアウトでは-/-クローンが得られなかったため、+/-の2クローンに対してshRNAによるノックダンを組み合わせたところ、細胞内でのcccDNA形成の低下が確認された。さらに初代ヒト肝細胞へのHBV感染実験においてFEN1阻害剤によるウイルス複製抑制が確認された。これらのことから本研究開始当初有力候補であったFEN1のcccDNA形成への関与が示されたと考え、現在論文を投稿中である。また、新規に開発したin vitro cccDNA formationアッセイの改良を進め、細胞溶解物を用いたcccDNA形成、それに対する阻害剤の効果を検討した。現在結果の得られた複数の候補についてさらなる解析を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
cccDNA形成に関わる因子はDNA修復因子が想定されており、これは培養細胞実験下ではcell growthにも影響しうるため、実験結果の解釈が複雑である。本研究で進めている、チューブ内でcccDNA形成能を検討するin vitro cccDNA formationアッセイにより、新たな側面からの解析が可能となると考えている。また、本研究開始時に有力な候補としていたFEN1のcccDNA形成への関与を示唆するデータが蓄積された。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の予測していたDNA修復因子のHBV cccDNA形成への関与が示されたので、予定通り関連する他の因子について解析を続ける。
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| Causes of Carryover |
組み換え酵素購入頻度が増えることが見込まれる次年度に使用することが効率的であると考えたため。次年度には消耗品購入等にあてる。
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