先天性横隔膜ヘルニアモデルマウス低形成肺に対する脱落乳歯歯髄幹細胞の有用性の検討

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K11513
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 近藤 琢也 九州大学, 大学病院, 医員 (00644725)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田口 智章 九州大学, 医学研究院, 教授 (20197247) ; 江角 元史郎 九州大学, 大学病院, 助教 (30452759) ; 木下 義晶 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (80345529)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 先天性横隔膜ヘルニア / 間葉系幹細胞 / 胎児治療

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、新生児期に肺高血圧や呼吸障害をきたし、現在も予後不良な疾患とされる先天性横隔膜ヘルニアに対して、長期予後、呼吸機能の改善を目指し、出生前診断のついた患者に対しての、間葉系幹細胞 による胎児治療の有効性を検討することを目的としている。
マウスを用いた先天性横隔膜ヘルニアモデルを作成するための実験計画申請を行い、まずはニトロフェンを用いた疾患モデル作成方法の確立を目指した。ニトロフェンを妊娠日齢8.5のマウスに経口的に投与することで、横隔膜ヘルニアの胎仔を得ることができた。当初、経口投与自体も手技的な慣れを要し、経口的な投与のみで母獣の死亡例も認めたが、2回目以降は死亡例なく投与できた。胎仔の横隔膜ヘルニアの発生率は30%程度と見積もっていたが、実際には発生率が非常に低く（10%程度であり、胎仔数も減少した）、評価には多数のマウスを要する上に、安定性に欠くと判断した。マウスの種類を変更して同様の実験を行ったが、横隔膜ヘルニア胎仔を得ることができなかった。疾患モデル作成を確立できなかったため、母獣への間葉系幹細胞の投与に移行することができなかった。モデルマウス作成の困難さから、マウス胎仔肺の発生学的評価に変更し、横隔膜ヘルニアの有無にかかわらず、ニトロフェン投与マウス胎仔の肺は低形成であることを前提として評価を行うこととした。現在正常胎仔マウスの各妊娠日齢におけるコントロールの肺切片を作成している段階である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

ニトロフェンを用いた横隔膜ヘルニアモデルマウス作成を企画、施行したが、横隔膜ヘルニアの発生率が非常に低い状況であった（20%程度）。解析しうるnを確保するためのマウスの犠死亡数を考慮し、マウスの種類を変更し再度モデルマウス作成を試みたが、妊娠マウス作成の時点で困難であった。

Strategy for Future Research Activity

横隔膜ヘルニアモデルマウスではなく、肺低形成マウスとして用いてマウス肺の発生学的経過を解明することを目的とし、胎児マウスの日齢ごとの肺切片を病理学的に評価していくことで、間接的に横隔膜ヘルニアの治療に寄与しうると思われる。

Causes of Carryover

次年度使用額が生じた理由:今年度に施行した横隔膜ヘルニアモデルマウスの発生率が非常に低い状況であったため、次年度には肺低形成マウスを用いて胎児マウスの日齢ごとの肺切片を病理学的に評価していくこととしたため、継続使用額が生じた。
使用計画:実験動物、試薬、抗体等に使用