2019 Fiscal Year Research-status Report

顎骨再生における頬脂肪由来脱分化脂肪細胞・PRP複合体のトランスレーショナル研究

Research Project

Project/Area Number	17K11864
Research Institution	Osaka Dental University
Principal Investigator	窪寛仁大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (70388362)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	橋本典也大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (20228430)
Project Period (FY)	2017-04-01 – 2021-03-31
Keywords	脱分化脂肪細胞
Outline of Annual Research Achievements	脱分化脂肪細胞（dedifferentiated fat cells：DFATs）は低侵襲に獲得可能な細胞集団であり，また多能性を有することから再生医療用ドナー細胞として有用である。またDFATsは非常に純度が高いことから，含まれる未分化な細胞の割合が高く，様々な組織の細胞へ分化する能力が高い可能性が示唆されている。顎口腔領域を専門とする歯科医師の特性を活かすため、頬脂肪体からDFATsを獲得し，ドナー細胞として用いる。ゲノム変異性安全性試験で安全性を確認したうえで、自己多血小板血漿（PRP)と複合化し、培養骨を作製する。最終的に、DFATs自家移植モデル（イヌ）によるトランスレーショナルリサーチを行い早期臨床に繋げるのが本研究の目的である。ラット鼠径部から脂肪組織を採取してDFATを作製し，さらに同ラットから採血してPRPを作製し，全血とPRPの血球数と血小板数を測定した。次に， PRP添加培地（3％，5％ 7％，10%：各質量％濃度）でDFATを培養し，WST-8で細胞の増殖率を測定した。さらに，①通常培地，②骨分化培地，③骨分化培地（FBS無添加）＋PRP（3％，5％，7％，10%：各質量％濃度）でDFATを培養し，誘導開始後3，7，21日でAlizarin red染色によるCa産生能の評価とreal time RT-PCRによる骨芽細胞マーカーの遺伝子発現とを評価した。 PRP添加によって細胞の増殖率は著明に上昇した。また，誘導開始後21日のAlizarin red染色の検索では何れの条件も陽性だったが，骨分化培地と骨分化培地+PRPの条件とでは骨芽細胞マーカーの上昇に差があり、PRPの濃度によってマーカーの発現時期に差が認められた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 骨分化培地にPRPを添加した群の方が、細胞の増殖率は著明に上昇し、早期に骨芽細胞マーカーの遺伝子発現が認められることが判明した。また，PRPには至適濃度があることが確認できたため。
Strategy for Future Research Activity	ラット頭蓋冠欠損モデルを作製し、すでに細胞をゼラチンスポンジを足場として移植しており、Ｘ線学的評価と病理組織学的評価を行う予定である。
Causes of Carryover	動物実験に使用する費用が少なかったため。ラット頭蓋冠欠損モデルを作製し、すでに細胞をゼラチンスポンジを足場として移植しており、病理組織学的評価の標本作製費に使用する。