2017 Fiscal Year Research-status Report
ダウン症候群患者由来iPS細胞を用いた肺血管病変発症機序の解明
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17K16261
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
杉辺 英世 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (30791595)
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Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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Keywords | iPS細胞 / ダウン症候群 |
Outline of Annual Research Achievements |
ダウン症候群患者由来iPS細胞として2ライン、健常人由来iPS細胞として1ライン、さらにコントロールとして、ダウン症候群由来iPSのうち1ラインを、Cre/loxP技術を用いて、ダイソミーへとコレクションした1ラインを用いて実験を行った。それぞれを、フィーダーフリー環境にアジャストさせるため、マトリゲルコーティングののちにmTeSR1培地にて飼育した。これにより、未分化な状態での維持継代培養が可能であった。 既報の方法に従って、血管内皮細胞と血管平滑筋細胞への分化誘導を行った。血管平滑筋細胞においては、95%以上の効率で分化誘導が可能であり、それは平滑筋細胞特異的マーカーの発現によって確認した。血管内皮細胞については、そのままでは5-30%程度の分化誘導効率であるため、培養6-8日目において、anti-PECAM1抗体を用いたFACSによる単離を行った。それにより95%以上の効率で血管内皮細胞を得ることができた。これらを1ヶ月間ほど拡大培養し、実験に用いることとした。血管平滑筋細胞においては、増殖能の上昇がみられたが、アポトーシスには変化がなかった。ROS産生においても変化は認めなかった。内皮細胞においては、増殖能に変化は見られなかったもののROS産生は上昇していた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
iPS細胞からの、血管内皮細胞と血管平滑筋細胞への分化誘導系については安定して確率している。また、コントロールとして、正常由来iPS細胞だけではなく、トリソミー21iPS細胞をダイソミーへとコレクションしたラインを用いることにより、ライン間での表現型の差によるバイアスを排除できるように実験系を組み立てることができた。
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Strategy for Future Research Activity |
分化誘導した血管内皮細胞と血管平滑筋細胞におけるcell physiologyの差をまず検証する。さらに、網羅的な発現解析を行うことで、どのようなシグナル系がその表現型の差に関与しているのかを検証する。
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Research Products
(1 results)