2017 Fiscal Year Research-status Report
新規治療薬開発に向けてのエナメル上皮腫増悪因子の分子生物学的解析
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17K17286
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| Research Institution | Iwate Medical University |
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Principal Investigator |
石河 太知 岩手医科大学, 歯学部, 助教 (10569247)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | エナメル上皮腫 / Butyric Acid |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エナメル上皮腫の顎骨内の侵襲的な増大や，まれに見られる悪性化・転移には，増悪因子として細胞接着因子である Laminin 等の発現や，サイトカインの関与が示唆されている. しかし，実験に使用できる細胞株が少なく，腫瘍の部位により細胞に多様性のある本疾患の分子生物学的なメカニズムについては不明な点が多い. さらに，その増悪には歯周病原細菌の関与が疑われるものの，それら細菌の影響はこれまで全く検討されていない. そこで本研究では，腫瘍細胞の移動能に深く関わる上皮性因子と間葉系因子の発現バランスを異にし，同一のエナメル上皮腫組織から樹立された新たな3種の細胞株(HAM1，HAM2，HAM3)を用い，細胞接着因子，サイトカインに加え，細菌由来因子も含めた本疾患の増悪に関するメカニズムを分子生物学的観点から明らかにし， 新規治療薬開発の一助となることを目的とする.
本年度はこの３種の細胞株を用いてエナメル上皮腫細胞における分子生物学的反応の検討を行った．具体的には歯周病原細菌が産生するButyric Acid やサイトカインを用いてHAM1，HAM2，HAM3を刺激し，細胞接着因子であるLaminin332を対象としてLaminin b3 mRNA の発現や，種々のサイトカイン mRNA の発現を検討した．その結果，Butyric Acid の刺激によってEGF mRNA の発現が上昇し，EGFの刺激によってLaminin b3 mRNA の発現が上昇した。さらに，悪性腫瘍の浸潤に関わるとされるPodoplanin やLaminin b3 の発現に関わるとされるTGFb1 に着目し，検討を加えた。その結果，Butyric Acid の刺激においてこれらのmRNA 発現に優位な差は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は，同一のエナメル上皮腫から樹立された３種の細胞株，HAM1，HAM2，HAM3を用いて，歯周病原細菌が産生するButyric Acid による刺激時のサイトカイン産生を検討し、さらにそこで優位に産生が上昇したサイトカインによるHAM1，HAM2，HAM3刺激時の細胞接着因子について検討を行った。これにより，現在までは踏み込めていなかった，エナメル上皮腫細胞における細菌由来因子とサイトカイン，細胞接着因子の関係が明らかになりつつある。さらに次年度の計画にも着手していることから，現在までの進捗状況としてはおおむね順調に進展していると言える。
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| Strategy for Future Research Activity |
前年度までに明らかとなった事に加え、より詳細な検討を加える。具体的にはこれら３種のエナメル上皮腫細胞株，HAM1，HAM2，HAM3を用いて他のサイトカインや細胞接着因子のmRNA発現についても検討し，また，ELISA法を用いたタンパクレベルでの解析に着手する．また，前年度までに発現が増強することが明らかとなっているLaminin を用いたmigration assay を行い，これら３種の細胞株におけるLaminin の働きを検討する．
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| Causes of Carryover |
本年度予定していたmigration assayを次年度以降に行うこととしたため，それに伴うタンパクの購入が次年度以降になり本年度使用額が予算と比べわずかであるが少なくなった。
次年度はこのmigration assay に加え，前年度までに検討していないサイトカインや細胞接着因子について検討するため，本年度持ち越し分を加えて来年度予算は，各種キット類，酵素試薬，生化学試薬，阻害剤，その他消耗品代にあてる．
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