2017 Fiscal Year Research-status Report
Identification of microRNA as a serum biomarker for regulatory T cell in CRC cases.
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17K19608
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
三森 功士 九州大学, 大学病院, 教授 (50322748)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| Keywords | Treg / microRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、メラノーマに対する抗PD-1抗体の非常に高い奏効率を受けて、固形がんに対する抗腫瘍免疫応答が注目されており、免疫応答機構の存在にも関わらず、腫瘍内多様性を減少させることが出来ていないことは、大腸がん局部での免疫応答が正常に機能していないことが示唆される。免疫応答機構は大腸がんの転移再発と予後を決める要因と考えられ、大腸がんにおける免疫応答と腫瘍細胞の反応機序の解明は重要な課題である。特に、がん抗原に対する免疫応答を制御する制御性T細胞(Treg)が、がんに対する宿主免疫応答機構として存在しており、Tregの制御機構について全く新しい視点から明らかにしたい。様々な免疫機構で重要な役割を担う遺伝子・タンパク群が存在するが、それらを多面的に制御するmicroRNA (miRNA)についてはあまり明らかにされていない。血液中のmiRNAは疾病の病態に伴って変動することが知られており、またRNaseから安定しているため、血液中バイオマーカーとしての臨床応用が期待されている。制御性T細胞と関連するmiRNAについての報告例はすでにあるが、「Treg制御療法のバイオマーカーあるいは診断と治療の標的分子」となる臨床的有用性を示すmiRNAの発見には到っていない。われわれは二つのサブグループ解析を比較することにより、真のTreg関連miRNAを同定することを目的とした。グループ（1）大腸癌10症例の手術検体よりTILを分離し、Type A, Bに分類した上、sortしたFrⅠ+Ⅲ, FrⅡについてmiRNA arrayを実施する。グループ（2）他方、われわれは大腸がん切除80症例(3ヶ月毎2年間)経時的に血液検体を採取し、血清からRNAを抽出後、miRNA arrayを施行済み。DBを用いて①再発転移および②化学療法抵抗性のbiomarker miRNA群を同定する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
まず、プレリミナリーな予備実験として、大阪大学免疫学フロンティア研究センターにて大腸がん臨床検体から細胞分離を実施した。
大腸がん症例原発巣より5か所からサンプリングし、可及的速やかにTILの分離を開始した。RNA-seqについてはできるだけ新鮮な標本がよく、1x10^7 cells程度必要であった。今回分離したTILについては-80℃で凍結したため、それを用いてRNA-seqすることは困難であるが、DNA-seqおよび追加のFACS解析は可能であった。今回、5.0x10^5～3.5x10^7 cellsの検体を採取しえた。2x10^5 cellsあればFACS解析可能であった。組織からのTILの採取に引き続きFACS解析を施行した。用いた抗体はCD3,CD4,CD8.CD45RA,CCR7等、細胞内染色としてFOXP3,Ki67とした。当初予定していたTGFβ,IL12についてはstimulusが必要であり実施しない。FACS解析の結果については、5ヶ所でe Tregとnon-Tregの割合に大きな違いはなかったが、傾向を述べるにはさらなる症例の追加が必要である。
グループ（1）現在14症例（58検体）の集積を終えて、上記予備実験にしたがいFACSにてsortingを施行中である。それぞれの分画で発現の異なるmiRNAについてEnrichment解析を含めた機能解析を行う予定である。
グループ（2）これまでの結果microRNA/遺伝子axis として、SWI/SNF complexのEZH2遺伝子に注目している。すなわち、EZH2を標的にするmicroRNAの過剰発現によりFOXP3をはじめとするTreg関連分子が軒並み発現異常を来していることを明らかにした。したがって、今後はTregに関連するこのmicroRNA について機能解析を進めている。
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| Strategy for Future Research Activity |
集積した14症例、58検体 (11症例 multi-region, 3症例 single-region)についてsortingを遂行し、miRNA arrayを施行する。Tregの分画を決定するCD45RA, CD25の陽性、陰性のカットオフの決定が困難であるとともに、当研究におけるkey pointとなるため、healthy donorを複数症例用いてカットオフ値 (特にCD25)を慎重に決定する。Sort後の細胞数の担保が困難な場合は、FrⅠ+Ⅲ vs FrⅡすなわち、TregをCD25low、highに分類して比較することも検討している。並行して、健常人の末梢血よりperipheral blood mononuclear cell (PBMC)を単離し、non-Treg, effector Tregをsortingする。その後、miRNA arrayを施行し、Treg分画に関与するmiRNAを同定する。
それぞれの分画における高発現のmiRNA群を参考にonlineのmiRNA toolであるmiEAAを用いて、Enrichment解析を施行することで、末梢血のTreg分画に関連するpathwayを同定する。同様に腫瘍浸潤リンパ球におけるTregについても解析を行う。同定したmiRNAについて、グループ2のサンプルにおいて、術前の血清での発現量で予後にどのような差がつくかを検討する。
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| Causes of Carryover |
来年度の実験消耗品にて使用予定
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[Journal Article] GWAS Identifies Two Novel Colorectal Cancer Loci at 16q24.1 and 20q13.12.2018
Author(s)
Tanikawa C, Kamatani Y, Takahashi A, Momozawa Y, Leveque K, Nagayama , Mimori K, Mori M, Ishii H, Inazawa J, Yasuda J, Tsuboi A, Shimizu A, Sasaki M, Yamaji T, Sawada N, Iwasaki M, Tsugane S, Naito M, Wakai K, Koyama T, Takezaki T, Yuji K, Murakami Y, Nakamura Y, Kubo M, Matsuda K
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Journal Title
Carcinogenesis
Volume: Epub
Pages: Epub
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Identification of ARL4C as a Peritoneal Dissemination-Associated Gene and Its Clinical Significance in Gastric Cancer.2018
Author(s)
Hu Q, Masuda T, Sato K, Tobo T, Nambara S, Kidogami S, Hayashi N, Kuroda Y, Ito S, Eguchi H, Saeki H, Oki E, Maehara Y, Mimori K
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Journal Title
Ann Surg Oncol
Volume: 25(3)
Pages: 745-753.
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Antitumor effects of the antiparasitic agent ivermectin via inhibition of Yes-associated protein 1 expression in gastric cancer.2017
Author(s)
Nambara S, Masuda T, Nishio M, Kuramitsu S, Tobo T, Ogawa Y, Hu Q, Iguchi T, Kuroda Y, Ito S, Eguchi H, Sugimachi K, Saeki H, Oki E, Maehara Y, Suzuki A, Mimori K
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Journal Title
Oncotarget.
Volume: 8(64)
Pages: 107666-107677
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Combined mutation of Apc, Kras and Tgfbr2 effectively drives metastasis of intestinal cancer.2017
Author(s)
Sakai E, Nakayama M, Oshima H, Kouyama Y, Niida A, Fujii S, Ochiai A, Nakayama KI, Mimori K, Suzuki Y, Hong CP, Ock CY, Kim SJ, Oshima M
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Journal Title
Cancer Res
Volume: canres.3303
Pages: canres.3303
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Circulating exosomal microRNA-203 is associated with metastasis possibly via inducing tumor-associated macrophages in colorectal cancer.2017
Author(s)
Takano Y, Masuda T, Iinuma H, Yamaguchi R, Sato K, Tobo T, Hirata H, Kuroda Y, Nambara S, Hayashi N, Iguchi T, Ito S, Eguchi H, Ochiya T, Yanaga K, Miyano S, Mimori K
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 8(45)
Pages: 78598-78613
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Japanese genome-wide association study identifies a significant colorectal cancer susceptibility locus at chromosome 10p14.2017
Author(s)
Takahashi Y, Sugimachi K, Yamamoto K, Niida A, Shimamura T, Sato T, Watanabe M, Tanaka J, Kudo S, Sugihara K, Hase K, Kusunoki M, Yamada K, Shimada Y, Moriya Y, Suzuki Y, Miyano S, Mori M, Mimori K
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Journal Title
Cancer Sci.
Volume: 108(11)
Pages: 2239-2247
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Clinical significance of ZNF750 gene expression, a novel tumor suppressor gene, in esophageal squamous cell carcinoma.2017
Author(s)
Nambara S, Masuda T, Tobo T, Kidogami S, Komatsu H, Sugimachi K, Saeki H, Oki E, Maehara Y, Mimori K
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Journal Title
Oncol Lett
Volume: 14(2)
Pages: 1795-1801
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Phosphoserine Phosphatase Is a Novel Prognostic Biomarker on Chromosome 7 in Colorectal Cancer.2017
Author(s)
Sato K, Masuda T, Hu Q, Tobo T, Kidogami S, Ogawa Y, Saito T, Nambara S, Komatsu H, Hirata H, Sakimura S, Uchi R, Hayashi N, Iguchi T, Eguchi H, Ito S, Nakagawa T, Mimori K
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Journal Title
Anticancer Res.
Volume: 37(5)
Pages: 2365-2371
Peer Reviewed
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[Journal Article] Up-regulation of SLC9A9 Promotes Cancer Progression and Is Involved in Poor Prognosis in Colorectal Cancer.2017
Author(s)
Ueda M, Iguchi T, Masuda T, Komatsu H, Nambara S, Sakimura S, Hirata H, Uchi R, Eguchi H, Ito S, Sugimachi K, Mizushima T, Doki Y, Mori M, Mimori K
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Journal Title
Anticancer Res.
Volume: 37(5)
Pages: 2255-2263.
Peer Reviewed
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[Journal Article] Overexpression of heat-shock factor 1 is associated with a poor prognosis in esophageal squamous cell carcinoma.2017
Author(s)
Tsukao Y, Yamasaki M, Miyazaki Y, Makino T, Takahashi T, Kurokawa Y, Miyata H, Nakajima K, Takiguchi S, Mimori K, Mori M, Doki Y:
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Journal Title
Oncol Lett.
Volume: 13(3)
Pages: 1819-1825
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Altered Expression of Hippo Signaling Pathway Molecules in Intrahepatic Cholangiocarcinoma2017
Author(s)
Sugimachi K, Nishio M, Aishima S, Kuroda Y, Iguchi T, Komatsu H, Hirata H, Sakimura S, Eguchi H, Bekki Y, Takenaka K, Maehara Y, Suzuki A, Mimori K
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Journal Title
Oncology
Volume: 93(1)
Pages: 67-74
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] MOB1-YAP1/TAZ-NKX2.1 axis controls bronchioalveolar cell differentiation, adhesion and tumour formation.2017
Author(s)
Otsubo K, Goto H, Nishio M, Kawamura K, Yanagi S, Nishie W, Sasaki T, Maehama T, Nishina H, Mimori K, Nakano T, Shimizu H, Mak TW, Nakao K, Nakanishi Y, Suzuki A
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Journal Title
Oncogene
Volume: 36(29)
Pages: 4201-4211
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Clinical Significance of FANCD2 Gene Expression and its Association with Tumor Progression in Hepatocellular Carcinoma.2017
Author(s)
Komatsu H, Masuda T, Iguchi T, Nambara S, Sato K, Hu Q, Hirata H, Ito S, Eguchi H, Sugimachi K, Eguchi H, Doki Y, Mori M, Mimori K
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Journal Title
Anticancer Res.
Volume: 37(3)
Pages: 1083-1090
Peer Reviewed
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[Journal Article] Clinical Impact of Tumor-Infiltrating Lymphocytes in Esophageal Squamous Cell Carcinoma.2017
Author(s)
Sudo T, Nishida R, Kawahara A, Saisho K, Mimori K, Yamada A, Mizoguchi A, Kadoya K, Matono S, Mori N, Tanaka T, Akagi Y
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Journal Title
Ann Surg Oncol.
Volume: 24(12)
Pages: 3763-3770.
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Downregulation of ST6GALNAC1 is associated with esophageal squamous cell carcinoma development.2017
Author(s)
Iwaya T, Sawada G, Amano S, Kume K, Ito C, Endo F, Konosu M, Shioi Y, Akiyama Y, Takahara T, Otsuka K, Nitta H, Koeda K, Mizuno M, Nishizuka S, Sasaki A, Mimori K
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Journal Title
Int J Oncol.
Volume: 50(2):
Pages: 441-447
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] The Expression of CCAT2, a Novel Long Noncoding RNA Transcript, and rs6983267 Single-Nucleotide Polymorphism Genotypes in Colorectal Cancers.2017
Author(s)
Kasagi Y, Oki E, Ando K, Ito S, Iguchi T, Sugiyama M, Nakashima Y, Ohgaki K, Saeki H, Mimori K, Maehara Y:
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Journal Title
Oncology.
Volume: 92(1)
Pages: 48-54
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Attenuated RND1 Expression Confers Malignant Phenotype and Predicts Poor Prognosis in Hepatocellular Carcinoma2017
Author(s)
Komatsu H, Iguchi T, Masuda T, Hirata H, Ueda M, Kidogami S, Ogawa Y, Sato K, Hu Q, Nambara S, Saito T, Sakimura S, Uchi R, Ito S, Eguchi H, Sugimachi K, Eguchi H, Doki Y, Mori M, Mimori K
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Journal Title
Ann Surg Oncol.
Volume: 24(3)
Pages: 850-859
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] As a Novel Prognostic Marker, Cysteine/histidine-rich 1 (CYHR1) is a Therapeutic Target in Patients with Esophageal Squamous Cell Carcinoma.2017
Author(s)
Desaki R, Sawada G, Okumura H, Ikeda R, Tanabe K, Komatsu H, Mimori K, Mori M, Kita Y, Uchikado Y, Arigami T, Uenosono Y, Owaki T, Ishigami S, Natsugoe S:
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Journal Title
Ann Surg Oncol.
Volume: 24(2)
Pages: 586-593
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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