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2006 Fiscal Year Annual Research Report

開口放出で働く繋留因子Exocyst複合体の立体構造解析

Research Project

Project/Area Number 18054009
Research InstitutionTokyo Institute of Technology

Principal Investigator

深井 周也  東京工業大学, バイオ研究基盤支援総合センター, 助教授 (10361792)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 堀内 久徳  京都大学, 大学院医学系研究科, 講師 (90291426)
Keywords膜融合 / 小胞輸送 / 開口放出 / X線結晶構造解析 / 電子顕微鏡 / 超分子複合体 / 低分子量GTPase
Research Abstract

開口放出は,生理活性物質の放出,受容体や輸送体などの細胞表面への呈示,さらには細胞の形態変化に伴う膜の供給に関わる重要な生命現象であり,積荷を載せた小胞が細胞膜と融合することにより起きる.膜融合反応は,Rabを初めとする特定の低分子量GTPaseとエフェクターとの相互作用によってGTP依存的に制御されている.本研究では,開口放出で働く繋留因子Exocyst複合体と,そこに相互作用する低分子量GTPaseとの複合体の立体構造解析を行ない,繋留の物理的機構およびその制御機構の構造基盤を確立することを目的とした.我々は,これまで電子顕微鏡およびX線結晶構造解析に向けて,Exocyst複合体をブタ脳から精製する方法を検討してきた.複合体が規則的なクラスターを形成する傾向は溶液中のMg^<2+>濃度を高めることにより改善があったが,粒子の大きさのばらつきを完全に無くすことはできなかった.また,Sec8サブユニットのC末端ペプチドに対する抗体が結合した状態の観察では,結合像を観察できたものの,粒子の均一性の悪さのため粒子の配向を決定するには至らなかった.このような現状ではあるが,酢酸ウラニルによる負染色の影響を受けている可能性も考えられるため,極低温電子顕微鏡による氷包埋像の観察あるいは結晶化も視野に入れて,より大量に精製する方法を検討したい.一方,ブタ脳からの精製と並行して,昆虫細胞Sf9とバキュロウイルスをつかった発現系によるExocyst複合体(あるいはサブ複合体)の再構成の試みを続けてきた.全てのサブユニットの発現系を構築するには至っていないが,Sec5,Sec6,Sec8についてはウイルスの調製を終えており,Exo70,Exo84についてはpFastBacへの組み込みを終えている.

  • Research Products

    (8 results)

All 2006

All Journal Article (8 results)

  • [Journal Article] tructural basis for sulfur relay to RNA mediated by heterohexameric TusBCD complex2006

    • Author(s)
      T.Numata, S.Fukai, Y.Ikeuchi, T.Suzuki, O.Nureki
    • Journal Title

      Structure 14

      Pages: 357-366

  • [Journal Article] Crystallization and preliminary X-ray analysis of the tRNA thiolation enzyme MnmA from Escherichia coli complexed with tRNA^<Glu>2006

    • Author(s)
      T.Numata, Y.Ikeuchi, S.Fukai, H.Adachi, H.Matsumura, K.Takano, S.Murakami, T.Inoue, Y.Mori, T.Sasaki, T.Suzuki, O.Nureki
    • Journal Title

      Acta Crystallographica F 62

      Pages: 368-371

  • [Journal Article] Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction of SecDF, a translocon-associated membrane protein, from Thermus thermophilus2006

    • Author(s)
      T.Tsukazaki, H.Mori, S.Fukai, T.Numata, A.Perederina, H.Adachi, H.Matsumura, K.Takano, S.Murakami, T.Inoue, Y.Mori, T.Sasaki, D.G.Vassylyev, O.Nureki, K.Ito
    • Journal Title

      Acta Crystallographica F 62

      Pages: 376-380

  • [Journal Article] Structural basis of RNA-dependent recruitment of glutamine to the genetic code2006

    • Author(s)
      H.Oshikane, K.Sheppard, S.Fukai, Y.Nakamura, R.Ishitani, T.Numata, R.L.Sherrer, L.Feng, E.Schmitt, M.Panvert, S.Blanquet, Y.Mechulam, D.Soll, O.Nureki
    • Journal Title

      Science 3122

      Pages: 1950-1954

  • [Journal Article] Snapshots of tRNA sulphuration via an adenylated intermediate2006

    • Author(s)
      T.Numata, Y.Ikeuchi, S.Fukai, T.Suzuki, O.Nureki
    • Journal Title

      Nature 442

      Pages: 419-424

  • [Journal Article] Complete crystallographic analysis of the dynamics of CCA-addition2006

    • Author(s)
      K.Tomita, R.Ishitani, S.Fukai, O.Nureki
    • Journal Title

      Nature 443

      Pages: 956-960

  • [Journal Article] Crystal structures of leucyl/phenylalanyl-tRNA-protein transferase and its complex with an aminoacyl-tRNA analog2006

    • Author(s)
      K.Suto, Y.Shimizu, K.Watanabe, T.Ueda, S.Fukai, O.Nureki, K.Tomita
    • Journal Title

      EMBO Journal 25

      Pages: 5942-5950

  • [Journal Article] Asymmetric coiled-coil structure with guanine nucleotide exchange activity2006

    • Author(s)
      Y.Sato, R.Shirakawa, H.Horiuchi, N.Dohmae, S.Fukai, O.Nureki
    • Journal Title

      Structure 15

      Pages: 245-252

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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