2007 Fiscal Year Annual Research Report
体内および細胞内リアルタイム動態解析に基づく遺伝子キャリアデザインの最適化
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18209006
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
橋田 充 Kyoto University, 薬学研究科, 教授 (20135594)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山下 富義 京都大学, 薬学研究科, 准教授 (30243041)
川上 茂 京都大学, 薬学研究科, 助教 (20322307)
樋口 ゆり子 京都大学, 薬学研究科, 研究員 (40402797)
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| Keywords | 遺伝子デリバリー / ターゲティング / プラスミドDNA / 免疫応答 / NFkB / リポソーム / ポリマー / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、生体内への投与から標的細胞での遺伝子発現までにはばかる遺伝子発現に関わる種々の障壁を分析し、論理的な設計によりin vivoでの効果的かつ安全な新規高効率遺伝子導入システムを開発することである。1)新規NFκB応答型プラスミドの開発:NFκB活性化のイメージングによる評価法確立を目的に、CMVプロモーターの上流にNFκB結合領域を5〜20回繰り返し分挿入したプラスミドを作成した。NFκB応答型プラスミドDNAを細胞へ導入後methosulfate処理したところNFκB活性化に応じたルシフェラーゼ発現増加が認められた。2)赤血球相互作用回避した肝指向型キャリアの開発:プラスミドDNAとキャリアの複合体を血中へ投与後の赤血球との相互作用は、毛細血管塞栓による遺伝子発現低下などの問題となる。直鎖型PEIは、分岐型PEIやカチオン性リポソームと比較し、赤血球との相互作用が少ない一方、リガンド修飾可能な箇所が少なく標的指向性の付与が困難である。そこで肝指向性の付与を目的に、リガンドとしてガラクトース修飾タンパク質とPEIならびにプラスミドDNAの複合体を調製した。この複合体の静脈内投与により赤血球との相互作用を回避し、標的である肝実質細胞への高い遺伝子導入が可能となった。3)免疫応答制御型プラスドDNA導入システムの開発:リポプレックスによる免疫応答の制御を目的に、NFκB活性化抑制能を有する二本鎖オリゴヌクレオチドNFκBデコイと免疫担当細胞指向型キャリアの複合体の前投与後、リポプレックスを静脈内投与したところ、遺伝子発現には影響を与えず、有意なNFκB活性化抑制ならびにサイトカイン産生抑制効果が得られた。以上、本年度は昨年までに得られた情報を元に新規プラスミドDNAならびに遺伝子導入システムの開発を行った。
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