2007 Fiscal Year Annual Research Report
機能領域の立体構造改変による新規高機能リソソーム病治療薬の開発
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18390303
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| Research Institution | Meiji Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
桜庭 均 Meiji Pharmaceutical University, 薬学部, 教授 (60114493)
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| Keywords | リソソーム病 / ファブリー病 / α-ガラクトシダーゼ / ザンドホッフ病 / テイ-サックス病 / β-ヘキソサミニダーゼA |
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| Research Abstract |
ファブリー病の疾患責任酵素であるα-ガラクトシダーゼ(GLA)と立体構造が似ているα-N-アセチルガラクトサミニダーゼ(NAGA)を構成するアミノ酸残基のうち,基質認識に関係する2残基を,構造解析の結果に基づいて置換した。この改変NAGAのcDNAを,チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞に導入し,改変NAGAを大量に培地中に分泌するクローンを選別した。このCHO細胞株が分泌する改変NAGA蛋白を,限外濾過,硫安沈殿およびカラムクロマトグラフィーで精製した。この発現蛋白質の酵素学的解析を行い,GLAとしての活性を持つことを確認した。
さらに,テイーサックス病やザンドホッフ病の疾患責任酵素蛋白質であるβ-ヘキソサミニダーゼA(HexA:αサブユニットとβサブユニットのヘテロ2量体)の立体構造情報を利用して,βサブユニットを構成するアミノ酸残基のうち,基質認識およびGM2活性化蛋白との結合に関係する領域の数アミノ酸残基を置換した。この改変βサブユニットをCHO細胞に導入し,内因性のβサブユニットとのヘテロ2量体を細胞内で作らせることに成功した。
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