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2007 Fiscal Year Annual Research Report

ルーメン内セルロース結合性タンパク質の網羅的解析

Research Project

Project/Area Number 18688015
Research InstitutionIbaraki University

Principal Investigator

豊田 淳  Ibaraki University, 農学部, 講師 (00292483)

Keywordsルーメン / セルロース結合性タンパク質 / モノクロナール抗体 / ゲノムライブラリー / セルラーゼ
Research Abstract

(背景)
反芻動物のルーメン内セルロース分解を効率化するためには、その分子メカニズムについて詳細に理解する必要がある。本研究ではルーメン内でセルロース分解をするタンパク質およびその遣伝子を同定するため、ルーメンからセルロース結合性タンパク質CBPSを直接分離・同定した。本年度は下記の項目について実施した。
(方法)
(1)CBPsのモノクロナール抗体の作成
(2)CBPsモノクロナール抗体の評価
ルーメン内植物繊維付着性細菌DNAの分離・精製とその遺伝子ライブラリーの作成
(結果)
ルーメンから分離されたCBPsを抗原にして、マウスに免疫し、CBPSに対するモノクロナール抗体を作製した。約100株のハイブリドーマがGBPSに対する抗体産生をしたので、該当株の培養上清の保存および細胞の保存を行った。この100株のハイブリドーマの培養上清をルーメン内容物をもちいて免疫組織化学的手法で評価している。さらにルーメン内植物繊維付着性細菌の分離とその遺伝子ライブラリーの作成をおこなった。モノクロナール抗体を用いたスクリーニングを考慮し、大腸菌でのタンパク質発現を可能とするLamdaZAPベクターに繊維付着菌ゲノムをライゲーションした。ルーメン内植物繊維付着性細菌DNAを評価するために、バクテリア16SrDNA領域をPCRし、TAクローニング後、シーケンスを行ったが、既知のセルロース分解菌と相同性の高い配列が存在した。

  • Research Products

    (4 results)

All 2008 2007 Other

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Biochemical characterization of ceffulose-binding proteins (CBPA and CBPB)from the rumen cellulolytic bacterium Eubacterium cellulosolvens 52007

    • Author(s)
      Yoshimatsu, M., Toyoda, A., Onizawa, N., Nakamura, Y., Minato, H.
    • Journal Title

      Biosci. Biotechnol. Biochem. 71

      Pages: 2577-2580

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 反芻動物のルーメン内容物に含まれるセルロース結合性タンパク質の分離と同定2008

    • Author(s)
      豊田淳・飯尾恒・湊一
    • Organizer
      日本畜産学会
    • Place of Presentation
      常磐大学
    • Year and Date
      2008-03-27
  • [Presentation] 反芻動物のルーメン内容物に含まれるセルロース結合性タンパク質の分離と同定2007

    • Author(s)
      豊田淳・飯尾恒・湊一
    • Organizer
      日本分子生物学会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2007-12-13
  • [Remarks] 茨城大学研究者情報総覧

    • URL

      http://info.ibaraki.ac.jp/scripts/websearch/index.htm

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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