2006 Fiscal Year Annual Research Report
Gタンパク質共役型受容体シグナリングの多様性に関する分子薬理学的解析
| Project/Area Number |
18790183
|
|---|
| Research Institution | Hokkaido University |
|---|
Principal Investigator |
堀之内 孝広 北海道大学, 大学院医学研究科, 助手 (20307771)
|
|---|
| Keywords | Gタンパク質共役型受容体 / エンドセリン受容体 / エンドセリン / Ca^<2+>シグナリング / Na^+ / Ca^<2+>交換体(NCX) / Na^+ / H^+交換体(NHE) / ストア作動性チャネル / 受容体作動性チャネル |
|---|
| Research Abstract |
Gタンパク質共役型受容体(G protein-coupled receptor:GPCR)を介して活性化されるシグナリングの多様性を解明するために、G_q、G_s、G_<12>タンパク質と共役しているエンドセリンA受容体(ET_AR)に焦点を当てた解析を行い、以下の知見を得た。
【実験の概略】ヒトET_ARを安定的に発現しているCHO細胞を作製した。この細胞に、Ca^<2+>蛍光試薬(Fura-2/AM、もしくは、Fluo-3/AM)を負荷することによって、エンドセリン-1(ET-1)刺激によって、活性化されるCa^<2+>シグナリングを解析した。
【結果・考察】ET_ARを強制発現させたCHO細胞において、ET-1刺激により、一過性及び持続性の細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応が引き起こされた。この細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応は、細胞外のCa^<2+>を除去することにより、著しく減弱した。この結果から、ET_ARを介した細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応に、細胞外からのCa^<2+>流入機構が関与していることが示唆された。そこで、様々なカチオンチャネル阻害薬を用いて詳細な解析を行ったところ、ET-1による一過性及び持続性の細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応に、(1)ストア作動性チャネル、(2)受容体作動性チャネル、(3)TRPCチャネル、といった複数のカチオンチャネルが関与していることが明らかになった。驚いたことに、これらのカチオンチャネルは、Ca^<2+>よりもむしろ、細胞外のNa^+流入を促進させることによって、細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応に寄与している可能性が示唆された。すなわち、上述のカチオンチャネルやNa^+/H^+交換体を介して細胞内Na^+濃度が上昇すると、細胞内のNa^+を細胞外へ排出するため、Na^+/Ca^<2+>交換体がリバースモードに駆動し、その結果、細胞内Ca^<2+>濃度上昇反応が生じると考えられた。
|
-
[Journal Article] Endothelin-1 decreases [Ca^<2+>]_i via Na^+/Ca^<2+> exchanger in CHO cells stably expressing endothelin ET_A receptor.2007
Author(s)
Horinouchi, T., Nishimoto, A., Nishiya, T., Lu, L., Kajita, E., Miwa, S.
-
Journal Title
European Journal of Pharmacology (in press)
Pages: doi: 10.1016/j.ejphar.2007.03.019
-
-
[Journal Article] Pharmacological evaluation of plasma membrane β-adrenoceptors in rat hearts using the tissue segment binding method.2006
Author(s)
Horinouchi, T., Morishima, S., Tanaka, T., Suzuki, F., Tanaka, Y., Koike, K., Muramatsu, I.
-
Journal Title
Life Sciences 79
Pages: 941-948
