2018 Fiscal Year Annual Research Report
高LET放射線と抗VEGF抗体の併用によるグリオーマ幹細胞制御機構の解明
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18H02770
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
長谷川 正俊 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (50251111)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小此木 範之 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構, 放射線医学総合研究所 重粒子線治療研究部, 医長(定常) (00750572)
大野 達也 群馬大学, 重粒子線医学推進機構, 教授 (10344061)
若月 優 自治医科大学, 医学部, 教授 (40399449)
三浦 幸子 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (60597095)
森 英一朗 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (70803659)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 高LET放射線 / 抗VEGF抗体 / 神経膠腫 / 幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
In vitroでの検討： 高LETの炭素イオン線との比較検討の為、ヒト悪性神経膠腫株（U-251 MG）に低LETのX線0～12Gy、陽子線0～10Gyの照射を行い、コロニー形成法で生存率の比較検討を行い、生存曲線から陽子線の生物学的効果比（RBE）を算出した。D50, D10, D0における比較で算出したRBEはそれぞれ、1.29, 1.18, 1.19であった。なお、U-251 MGについては既にVEGF産生、分泌を確認し、X線照射、抗VEGF抗体の影響を評価している。
In vivoでの検討： p53野生型の上衣芽腫，p53変異型の膠芽腫をヌードマウス（BALB/c nu/nu）に移植して、以下の①～⑥の６群に分けて実験を開始し、１）～３）の検討を実施している。
①：重粒子線照射（単独）群：炭素イオン線：290 MeV/u、6 cm-SOBP（NIRS） 2Gy ②：X線照射（単独）群：150kV: 20mA（Hitachi） 2Gy ③：抗VEGF抗体（単独）群：抗VEGF抗体20mg/kg ④：①重粒子線と③抗VEGF抗体（併用）群 ⑤：②X線と③抗VEGF抗体（併用）群 ⑥対照群
１）増殖遅延評価：腫瘍径を計測して倍加時間を算出し、増殖遅延を検討 ２）増殖分画、アポトーシス、幹細胞マーカーおよび関連因子、微小血管密度を検索：6、48時間後、6週間後に摘出した腫瘍でフォルマリン固定、パラフィン包埋切片を作製し、H.E.、Ki-67、CD133、CD44、Nestin、p53、Bax、PTEN、VEGF、GFAP等の染色、免疫組織化学を実施 ３）分子生物学的検討（DNAマイクロアレイ解析）：腫瘍組織の一部を摘出後、直ちにRNA安定液に浸透して保管後、total RNA抽出、GeneChip解析等を実施
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
計画したin vitroおよびin vivoの実験を開始して、解析を進行中で、結果が得られつつある。
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| Strategy for Future Research Activity |
In vitroでの検討では、X線、重粒子線等との比較を目的として、陽子線照射後の細胞生存とVEGF産生、分泌の評価を行い、さらに抗VEGF抗体の影響を検討していく計画である。
In vivoでの検討では、p53野生型の上衣芽腫，p53変異型の膠芽腫をヌードマウス（BALB/c nu/nu）に移植して行っている実験を継続して、重粒子線、X線、抗VEGF抗体およびこれらの併用による増殖抑制と細胞死、幹細胞の変化についての解析をすすめ、さらにDNAマイクロアレイ解析から関与する経路、遺伝子等を明らかにしていく計画である。
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