2019 Fiscal Year Research-status Report
Functional analysis of pertussis-like toxin from Salmonella spp.
| Project/Area Number |
18K06001
|
|---|
| Research Institution | Rakuno Gakuen University |
|---|
Principal Investigator |
内田 郁夫 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (70355204)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
玉村 雪乃 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生研究部門, 研究員 (90584384)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
|
| Keywords | サルモネラ / ADP-リボシル化毒素 / マクロファージ |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
Salmonella Typhimurium（ST）の強毒型と考えられているファージ型DT104は百日咳毒素様毒素（pertussis-like toxin ; Plt）の一つであるArtA/ArtB (ArtAB)を産生する。ArtABは百日咳毒素（Ptx）と同様に細胞内情報伝達因子であるG蛋白質をADP-リボシル化する。一方、S.Typhi (チフス菌)においてArtABとは異なるPlt として[PltA/PltB (PltAB)]の存在が報告されている。ArtABおよびPltABの両者とも種々の血清型菌に認められており、新たな病原因子としての意義が注目される。この研究では、Pltの病原性因子としての役割を明らかにし、サルモネラ症における診断・予防法開発のための知見を得ることを目的とする。これまでの研究により、artAB遺伝子はマイトマイシンC、H2O2、キノロン系抗生物質等の処理により誘導的に発現することおよびマクロファージ様細胞RAW264.7STに貪食された ST DT104は、細胞内においてartABを誘導的に発現することを明らかにした。本年度はArtABのマクロファージ細胞の殺菌能におよぼす影響につい解析した。RAW264.7細胞を精製ArtAB毒素で処理し、artABを保有しないS.Typhimurium KT10を貪食させ24時間後の細胞内の菌数を測定した。この結果ArtAB処理により細胞内の菌数が有意に増加することが明らかとなり、ArtABはマクロファージの殺菌能を阻害することを明らかにした。さらに本年度はS. Schwarzengrund HRS 32株のPltAをPURE systemを用いることによりin vitroで合成し、当該蛋白によるG蛋白質のADP-リボシル化について解析した。ArtAの合成蛋白はGi蛋白質をADP-リボシル化したが、PltAによるリボシル化は認められなかった。このことからPltAの標的蛋白はG蛋白質以外のものであることが示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度ArtABがマクロファージ細胞の殺菌能に影響を及ぼすことを明らかにした。さらに、貪食能、走化性、活性酸素等に与える影響について解析を進める必要がある。また、PltAはArtAと異なり、G蛋白質をADPリボシル化しないことが示唆された。このことは当初から予想されていたことであるが、さらに、PltAの標的分子についての探索を実施する必要がある。
|
| Strategy for Future Research Activity |
ArtABのマクロファージ細胞における貪食能および活性酸素産生能等に関する解析を実施する。本年度PltAのin vitroにおける合成に成功したことから、これを用いてPltAの標的蛋白質の探索を実施する。また、artAB欠失株のマクロファージ内における生残生についても引き続き解析を進める。
|
| Causes of Carryover |
当初購入を予定していたマウスの購入費が少なく済んだため。次年度はマウスを用いた実験、蛋白合成キット等の購入、論文投稿等に使用する。
|
Research Products
(2 results)
