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2022 Fiscal Year Research-status Report

Research on Physiological and Molecular mechanism of Eukaryotic Protein Kinase - Phosphatase System that Regulates Morphology of Clostridium perfringens

Research Project

Project/Area Number 18K07114
Research InstitutionJumonji University

Principal Investigator

成谷 宏文  十文字学園女子大学, 人間生活学部, 教授 (30452668)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 玉井 栄治  松山大学, 薬学部, 教授 (40333512)
Project Period (FY) 2018-04-01 – 2024-03-31
KeywordsClostridium perfringens / ガス壊疽菌 / シグナル伝達 / プロテインキナーゼ / プロテインホスファターゼ / 細胞壁生合成 / タンパク質相互作用 / Yeast Two-Hybrid Screen
Outline of Annual Research Achievements

グラム陽性病原細菌に普遍的に存在する真核型 Protein Ser/Thr Kinase (K) - Phosphatase (P)シグナル伝達系の機能をClostridiumperfringens (ガス壊疽菌)をモデルとして解明する。我々は既に、K のリン酸化基質タンパク質としてClostridium属細菌に特異的な繰り返しタンパク質相互作用領域 (TPR) を有する膜タンパク質 (S) を同定し、そのThr-92のリン酸化調節で同菌の隔壁形成・分裂・形態(菌長)を制御することを見いだしている。また S が必須酵素: IspG(非メ
バロン酸経路: 細胞壁生合成に関与)と MurF (D-Ala-D-Ala Ligase:細胞壁生合成経路)との相互作用を見いだしている。
本研究では、タンパク質間の相互作用がいくつも統合された高次ネットワークで行われる菌の『形態形成』における S-IspG-MurF複合体形成 と K-P 制御のメカニズムを明らかにする事を目的とする。具体的には in vivo Cross-Link 法によりS 複合体を K・P欠損株より単離し、その構成因子をLC-MS/MS により同定する。またK (二量体) の酸性アミノ酸(Glu/Asp)-Rich 領域の機能として His-Aspリン酸リレー系(Protein His Kinase) の走化性制御で知られる『メチル化Adaptation機構』を念頭に、Glu 変異株の解析、また Glu/Asp-Rich 領域との相互作用因子の同定を行う。本年度は、以下について検討を行う予定であったが、新型コロナの影響で昨年度に引き続き,まだ予備実験段階で進捗していないため,補助事業再延長を行なった。
1)S の新規相互作用因子の探索:候補因子の情報収集
2)他のClostridium属細菌S ホモログの比較解析/リン酸化部位決定:未実施
3)K の酸性アミノ酸領域の機能解析:ツールのデザイン

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

昨年度に引き続き,研究室の体制準備等が十分でなく、遅れている。

Strategy for Future Research Activity

昨年度、予定していた以下について、完遂する。
1)S の新規相互作用因子の探索:LC-MS/MS解析を行い、特定された因子の欠損株作製等の遺伝子解析を行う。
2)他のClostridium属細菌S ホモログの比較解析/リン酸化部位決定:リン酸化タンパク質の分画をAffinity Chromatographyで行い、Phosho-Thr/Ser抗体による
Western-Blott解析で確認後、LC-MS/MS解析によりリン酸化部位を含めタンパク質の特定を行う。
3)K の酸性アミノ酸領域の機能解析とKのシグナル分子の同定:作製した酸性アミノ酸領域の欠損/変異体の菌形態等の表現型を確認する。シグナル分子の同定
については、新規エンドリシン Amidase等 による細胞壁分解物およびD-Ala-D-Alaの添加によるリン酸化シグナル伝達系への影響等を検証する。

Causes of Carryover

LC-MS/MS解析の未発注のため(昨年度の消耗品を使用し研究を行なった)、次年度使用額が生じた。残額については、研究課題の完遂のため,LC-MS/MS解析の外注費用(50万程度)等に当てる。

  • Research Products

    (4 results)

All 2023 2022

All Journal Article (2 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] A Novel Single-Tube Eicosaplex/Octaplex PCR System for the Detection of Extended-Spectrum β-Lactamases, Plasmid-Mediated AmpC β-Lactamases, and Integrons in Gram-Negative Bacteria.2023

    • Author(s)
      Ahmed M Soliman , Hirofumi Nariya (Co-First Author) , Daiki Tanaka , Toshi Shimamoto , Tadashi Shimamoto
    • Journal Title

      Antibiotics (Basel)

      Volume: 12 Pages: 90

    • DOI

      10.3390/antibiotics12010090

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Complete genome sequences of two Escherichia coli clinical isolates from Egypt carrying mcr-1 on IncP and IncX4 plasmids .2022

    • Author(s)
      Soliman AM, Ramadan H, Yu L, Hisatsune J, Sugai M, Elnahriry SS, Nariya H, El-Domany RA, Shimamoto T, Jackson CR, Shimamoto T
    • Journal Title

      Front Microbiol.

      Volume: 13 Pages: 989045

    • DOI

      10.3389/fmicb.2022.989045. eCollection 2022

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] Function of the cell wall-binding domain of Clostridium perfringens autolysin2023

    • Author(s)
      青野 りよ,松永 望,玉井 栄治,成谷 宏文,櫃本 泰雄,片山 誠一
    • Organizer
      第96回日本細菌学会総会
  • [Presentation] Development and Optimization of Genetic Manipulation Systems in Group I Clostridium botulinum2023

    • Author(s)
      阿松 翔,斎藤 和樹,成谷 宏文,藤永 由佳子
    • Organizer
      第96回日本細菌学会総会

URL: 

Published: 2023-12-25  

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