2019 Fiscal Year Research-status Report
The establishment of drug screening system for polyglutamine disease using disease specific iPSCs
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18K07539
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| Research Institution | Aichi Medical University |
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Principal Investigator |
丹羽 淳一 愛知医科大学, 医学部, 教授 (50378022)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡田 洋平 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (30383714)
伊藤 卓治 愛知医科大学, 公私立大学の部局等, 客員研究員 (30794151)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 疾患特異的iPS細胞 / ポリグルタミン病 / 創薬スクリーニング / 球脊髄性筋萎縮症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1)解析に用いるSBMAモデル細胞の作製：全長AR24Q（正常型）または AR55Q, AR97Q（変異型）を定常発現するヒト骨格筋細胞株（Hu5/E18）からウマ血清存在下誘導した筋管において表現型を確認し、変異AR凝集体形成の有無を解析した。
(2)内在性伸長ポリグルタミン鎖を可視化し得る新規プローブの作成：単独では凝集体を形成しない正常ポリグルタミン鎖（正常CAGリピート数）をもつtruncate AR24QとEmGFPの融合タンパク （tAR24Q-EmGFP）を、伸長ポリグルタミン鎖をもつ全長AR（AR-97Q）とともにHEK293T細胞に導入することで、全長ARによる凝集体形成を可視化し得ることを確認した。しかし、truncateAR24Qでも高発現することで病態に影響し得ることから、より毒性の低いプローブの作成を進めている。
(3)疾患特異的iPS細胞を用いた検討：疾患特異的iPS細胞から運動ニューロンや骨格筋を誘導し、より効率的に表現型を検出するための成熟培養法、およびストレス負荷条件の検討を進めている。また、（1）で開発したプローブをレンチウイルスにより導入するためのベクターの構築を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
伸長ポリグルタミン鎖の可視化が可能なことを確認できており、より効率的に凝集体を可視化し得るプローブの作成を進め、レンチウイルスに搭載する準備を進めている。また、プローブを評価するための、疾患モデル骨格筋はほぼ完成した。また、疾患特異的iPS細胞を用いた解析も進めており、概ね順調に進捗していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
作製した疾患モデル細胞を用いて作成したプローブの評価を進めていく。また疾患特異的iPS細胞を用いたモデルの構築も進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
効率的な研究費の使用により、次年度使用額が生じた。翌年度分と合わせて、実験試薬や実験器具等の消耗品の購入、研究技術員の雇用等に充てる予定である。
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[Journal Article] Unveiling synapse pathology in spinal bulbar muscular atrophy by genome-wide transcriptome analysis of purified motor neurons derived from disease specific iPSCs2020
Author(s)
Onodera K, Shimojo D, Ishihara Y, Yano M, Miya F, Banno H, Kuzumaki N, Ito T, Okada R, Ohyama M, Yoshida M, Tsunoda T, Katsuno M, Doyu M, Sobue G, Okano H, Okada Y
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Journal Title
Mol. Brain
Volume: 13
Pages: 18
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Aberrant axon branching via Fos-B dysregulation in FUS-ALS motor neurons.2019
Author(s)
Akiyama T, Suzuki N, Ishikawa M, Fujimori K, Sone T, Kawada J, Funayama R, Fujishima F, Mitsuzawa S, Ikeda K, Ono H, Shijo T, Osana S, Shirota M, Nakagawa T, Kitajima Y, Nishiyama A, Izumi R, Morimoto S, Okada Y, Kamei T, Nishida M, Nogami M, Kaneda S, Ikeuchi Y, Mitsuhashi H, Nakayama K, Fujii T, Warita H, Okano H
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Journal Title
EBioMedicine.
Volume: 45
Pages: 362-378
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Src inhibition attenuates polyglutamine-mediated neuromuscular degeneration in spinal and bulbar muscular atrophy2019
Author(s)
Iida M, Sahashi K, Kondo N, Nakatsuji H, Tohnai G, Tsutsumi Y, Noda S, Murakami A, Onodera K, Okada Y, Nakatochi M, Okabe Y, Shimizu S, Mizuno M, Adachi H, Okano H, Sobue G, Katsuno M
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Journal Title
Nat. Commun.
Volume: 10
Pages: 4262
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Tandem paired nicking promotes precise genome editing with scarce interference by p532019
Author(s)
Hyodo T, Rahman ML, Karnan S, Ito T, Toyoda A, Ota A, Wahiduzzaman M, Tsuzuki S, Okada Y, Hosokawa Y, Konishi H.
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Journal Title
Cell Rep.
Volume: 30
Pages: 1195-1207
DOI
Peer Reviewed
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