2018 Fiscal Year Research-status Report
超保存領域に内在されたRNAメチル化スイッチと大腸がん進展の分子基盤
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18K07941
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
桑野 由紀 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 講師 (00563454)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 大腸がん / RNAメチル化 / 超保存領域 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
超保存領域（ultraconserved region: UCR）より転写されるRNA (T-UCRs)の一部は、大腸がん細胞において活性化し、細胞老化およびがん悪性化を制御する機能性RNAであることを見出している。しかしながら、セリン・アルギニン（SR）スプライシング調節因子（SR splocing factor）をコードするSRSF遺伝子由来のT-UCRが、中途ストップコドンを持つにもかかわらず、がん細胞において分解を受けず蓄積されるのか、そのメカニズムは未だ不明である。これまでの研究において、T-UCRの一部はoncogenicな機能性RNAとして働くこと、RNA修飾がT-UCRの2次構造形成に影響を与え、核内の異常蓄積を引き起こし、がん悪性化に関与する可能性が示唆された。そこで本研究では、T-UCRsのDNA障害ストレス依存的なRNAのアデノシンN6位のメチル化（メチル-6-アデノシン（m6A））を検討し、「RNAメチル化スイッチ」を介したT-UCRの発現調節メカニズムの解明を目標とした。
大腸がん組織Tissue パネルを用い、RNAメチル化関連因子の発現スクリーニングを行い、複数のRNAメチル化酵素が大腸がんで高発現していることを見出した。さらに、RNAメチル化酵素をノックダウンした大腸がん細胞では、細胞増殖及び細胞老化に有意な表現型の変化が認められた。また、非コードRNAカスタムマイクロアレイを用い、大腸がん細胞において高度にメチル化されたRNAを網羅的に解析した。さらに、T-UCRのRNAメチル化ステータスを減少させると、RNAの安定性に影響を与えることを見出した。
これまでの結果より、大腸がん細胞に蓄積するT-UCRの安定性に影響を与えるRNAメチル化に関連する標的因子が同定された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究課題において、研究計画の一つであった、大腸がん細胞に蓄積するT-UCRのメチル化の網羅的解析は順調に進み、現在候補となるT-UCRのRNAメチル化ステータスの変化を複数同定することが出来た。さらに、大腸がん細胞株を用いたノックダウン系及び過剰発現系の樹立により、複数のRNAメチル化酵素が大腸がんにおけるT-UCRのRNAメチル化ステータスの調節に影響を与えていることを見出すことが出来た。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度は、以下の研究計画を順次行う予定である。
１）リアルタイムイメージング手法を用いた細胞周期可視化と細胞周期依存的なT-UCRのRNAメチル化の解析、
２）RNAメチル化の臨床医学的意義の検討として、メチル化阻害T-UCR細胞株のマウス腫瘍形成への影響の確認、
中心に推進する。そのための準備として、現在CRISPR/Cas9を用いた遺伝子導入系でT-UCRの遺伝子領域に変異を加えたHCT116大腸がん細胞株のセレクションを行っている。
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| Causes of Carryover |
(理由)
３月に納品となり支払いが完了していないため。
(計画)
４月に支払いが完了する予定である。
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