2019 Fiscal Year Research-status Report
骨肉腫幹細胞モデルにおけるmiR-34aの役割と治療ターゲットの可能性の解析
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18K09058
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
武内 章彦 金沢大学, 附属病院, 助教 (70512218)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山本 靖彦 金沢大学, 医学系, 教授 (20313637)
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| Project Period (FY) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 骨肉腫 / がん幹細胞 / 糖化蛋白受容体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ヒト骨肉腫細胞にRAGEを強制発現させることによってmiR-34aの発現が低下し、その結果、SOX2、NANOG、MYCなどのがん幹細胞に関わるとされる分子の発現が亢進し、がん幹細胞様の性質を獲得するという分子機構を明らかにすることを目的とする。平成30年度はHOS-RAGE細胞株にmiR-34aを強制発現させること（HOS-RAGE+miR-34a）により、対照コントロール処理に比し、スフェロイドの形成能が有意に低下し、がん遺伝子c-MYCの発現も低下していることを確認した。
2019年度は以下の解析を行った。
1．Wntの発現について：HOS-RAGE細胞株において、幹細胞の増殖能・未分化性に関わるWnt遺伝子ファミリーの発現をreal-time PCR法を用いてHOS-mock細胞株と比較すると、HOS-RAGE細胞株で有意に高いことが明らかとなった。
2．Wntのスフェロイド形成への影響：Wntのアンタゴニストを培地中に添加すると、HOS-RAGE細胞株のスフェロイドの形成能が阻害され、さらに、Wnt siRNAで処置しても同様にスフェロイドの形成能が阻害された。
3．細胞周期の解析：Millipore社のMuse Cell cycle analyzerを用いて解析すると、HOS-RAGE細胞株では、HOS-mock細胞株に対して、S期の細胞割合が低下し、G2/M期の細胞割合が高かった。
4．手術検体腫瘍組織におけるmiR-34aの発現の解析：In-situ-hybridizationによる腫瘍組織におけるmiR-34aの安定した陽性像を得るために、陽性コントロールを用いて染色条件を調整中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
2019年度に、超免疫不全マウス（NOD.Cg-Prkdc scid Il2 tm1Wji/SzJ）へのHOS-RAGE細胞株移植実験と手術検体を用いたmiR-34aの発現解析（in-situ-hybridization）に着手したが、前者のマウスへの移植実験においては、腫瘍形成が認められず、また、後者のmiR-34aの発現解析では、染色条件の確定に時間がかかっている。そのためやや遅れていると判断した。しかし、mi-R-34aの下流のシグナルであるWntに関して新たな知見がえられつつあり研究を引き続き発展させていく予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
2020年度は、HOS-RAGE細胞株において、miR-34aの阻害、あるいはWntの阻害によって、細胞のフェノタイプが変化するかを解析する。さらに、2019年度の継続で、手術検体腫瘍組織における miR-34a の発現を in-situ hybridization で解析し、RAGE発現の関連と臨床経過との相関を解析する。また、HOS-RAGE細胞株を超免疫不全マウス（NOD.Cg-Prkdc scid Il2 tm1Wji/SzJ）に移植部位を再検討して移植し、腫瘍形成・転移能を評価する。
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| Causes of Carryover |
miR-34aの発現の解析を、染色条件の探索のみおこなったため経費の余剰が生じた。次年度に手術検体の染色を行うため試薬などで使用する予定である。
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[Journal Article] Surgical outcomes of patients with diffuse-type tenosynovial giant-cell tumours: an international, retrospective, cohort study2019
Author(s)
Mastboom MJL, Staals EL, Verspoor FGM, Rueten-Budde AJ, Stacchiotti S, Palmerini E, Schaap GR, Jutte PC, Aston W, Leithner A, Dammerer D, Takeuchi A, Thio Q, Niu X, Wunder JS, van de Sande MAJ; Tenosynovial Giant Cell Tumors (TGCT) Study Group.
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Journal Title
The Lancet Oncology
Volume: 20
Pages: 877～886
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Presentation] Novel treatment of Zaltoprofen for diffuse-type tenosynovial giant cell tumor arising in knee and ankle joint: a pilot study2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
32th Annual Meeting of the European Musculo Skeletal Oncology Society (EMSOS)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Residual epiphysis growth after epiphyseal-preservation surgery for childhood osteosarcoma around the knee joint.2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
32th Annual Meeting of the European Musculo Skeletal Oncology Society (EMSOS)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Ultrasonography-guided surgery for impalpable and ill-defined malignant soft tissue tumor2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
32th Annual Meeting of the European Musculo Skeletal Oncology Society (EMSOS)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Mid- to long-term clinical outcome of tumor-devitalized frozen autografts for segmental defect of long bones after tumor excision2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
20th International Society of Limb Salvage General Meeting （ISOLS）
Int'l Joint Research
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[Presentation] Intraoperative ultrasonography-guided surgery for impalpable and ill-defined malignant soft tissue tumor2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
20th International Society of Limb Salvage General Meeting （ISOLS）
Int'l Joint Research
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[Presentation] Factor analysis associated with local recurrence and limb function of 105 patients with diffuse-type tenosynovial giant cell tumor: A multinational study of an Asian population2019
Author(s)
Takeuchi A, Niu X, Chen WM, Nakamura T, Nathan SS, Ueda T, Iwata S, Kawai A, Kang YK, Asavamongkolkul A, Wang EHM, Singh VA, Shirai T, Tsuchiya H
Organizer
20th International Society of Limb Salvage General Meeting （ISOLS）
Int'l Joint Research
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[Presentation] Novel treatment of Zaltoprofen for diffuse-type tenosynovial giant cell tumor: a pilot study2019
Author(s)
Takeuchi A, Yamamoto N, Hayashi K, Matsubara H, Miwa S, Igarashi K, Taniguchi Y, Yonezawa H, Araki Y, Morinaga S, Tsuchiya H
Organizer
Annual Meeting of the Connective Tissue Oncology Society (CTOS)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Factor analysis associated with local recurrence and limb function of 105 patients with diffuse-type tenosynovial giant cell tumor: A multinational study of an Asian population2019
Author(s)
Takeuchi A, Niu X, Chen WM, Nakamura T, Nathan SS, Ueda T, Iwata S, Kawai A, Kang YK, Asavamongkolkul A, Wang EHM, Singh VA, Shirai T, Tsuchiya H
Organizer
Annual Meeting of the Connective Tissue Oncology Society (CTOS)
Int'l Joint Research
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