2019 Fiscal Year Research-status Report

新規RORγ転写共役因子を標的とした去勢抵抗性前立腺癌免疫療法の開発

Research Project

Project/Area Number	18K09162
Research Institution	Teikyo University
Principal Investigator	高橋さゆり帝京大学, 医学部, 講師 (40313217)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	小林隆志大分大学, 医学部, 教授 (30380520) 中川徹帝京大学, 医学部, 教授 (40591730)
Project Period (FY)	2018-04-01 – 2021-03-31
Keywords	前立腺癌 / ＲＯＲγ / ＥＳＳ２
Outline of Annual Research Achievements	Naive T cellがhelper T cell 17(Th17)へ分化するにはサイトカインであるIl6、TGF-βと核内受容体RORγ（RAR-related orphan receptor-γt）が必須である。われわれはＴＯＦ－ＭＳにより核内レセプターＲＯＲγの新たな転写共役因子として新規転写共役因子ＥＳＳ２を同定したため、前立腺癌増悪との関連を調べるため分子細胞学的手法を用い実験を進めた。【In vitroの実験】ヒト前立腺組織FFPEサンプルより前立腺におけるESS2の発現を確認した。前立腺癌細胞株においてLNCaP、CWR22よりPC3、DU145で高発現していたためPC3、DU145にレンチウイルスを導入ESS2ノックダウン安定株を作成したところ増殖能が低下、細胞形状が著明に変化した。これらのRNAを抽出しGene Set Enrichment Analysisを行った結果、DU145でのESS2ノックダウンにより染色体凝縮、レチノイン酸細胞内応答、染色体分裂、細胞周期制御の遺伝子群が大きく変動した。【 in vivoの実験】ＥＳＳ２ノックダウンＰＣ３安定株およびコントロールＰＣ３安定株のペレットを作成しヌードマウスの皮下に移植し2か月観察した。ＥＳＳ２ノックダウンで移植片は全く増殖せずＰＣ３細胞において強力な制癌作用があることを明らかにした。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 初年度に東京大学から帝京大学へ異動したため基礎研究室の整備から開始したため実験が遅れたが、2年目は前立腺癌細胞株を使ったin vitroの実験に加え、その結果を踏まえ倫理委員会の承認を得てヌードマウスを使用した実験も行い順調に進めることができた。
Strategy for Future Research Activity	In vivoでの効果を証明するためCre蛋白によりESS2 exon4-8を欠損させるESS2コンディショナルマウスを作成し成長後、前立腺をサンプリングする。コントロールおよびＥＳＳ２ノックダウン細胞で前立腺の重量、病理組織学的比較、ＲＮＡ発現の比較などを行う。
Causes of Carryover	Cre蛋白によりESS2 exon4-8を欠損させるESS2コンディショナルマウスを作成し交配、飼育していく計画だが動物施設利用申請の承認が遅れており次年度に持ち越すことになった。