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2007 Fiscal Year Annual Research Report

血栓症リスクファクター・先天性/後天性プロテインS欠乏症発症の分子基盤解明

Research Project

Project/Area Number 19590553
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

小嶋 哲人  Nagoya University, 医学部, 教授 (40161913)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 松下 正  名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (30314008)
高木 明  名古屋大学, 医学部, 助教 (30135371)
山本 晃士  名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (90362251)
KeywordsプロテインS(PS)欠損症 / PROS1遺伝子 / 遺伝子欠失 / プロモーター / ルシフェラーゼ・レポーター解析 / HepG2細胞 / エストラディオール(E2) / PS mRNA
Research Abstract

先天性プロテインS(PS)欠損症・異常症の遺伝子解析において、未解析の新たな症例検体については従来のPCRダイレクトシーケンス法を用いた遺伝子変異の同定を行った結果、新規変異を含めてその原因と思われるPROS1遺伝子変異を同定した。その中でPROS1遺伝子の蛋白翻訳領域には変異は見つからなかったものの、翻訳開始点より168bp上流のプロモーター領域に同定したC→T(c.-168C>T)の点突然変異のルシフェラーゼ・レポーター解析の結果、変異型では転写活性が20%まで低下し、先天性PS欠損症の原因と思われた。
先天性PS欠損症症例で従来の各エクソンのPCRダイレクトシーケンス法にてPROS1遺伝子に変異の見つからなかった症例において、PROS1遺伝子の15個の各エクソン部に偽遺伝子と区別するPCRプライマーを設定し、Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification(MLPA)法によってPROS1遺伝子欠失の同定解析を行ったところ、PROS1遺伝子の全欠失を示す症例を1例同定した。しかし、他の多くの症例では欠失を同定できず、遺伝子欠失の頻度はまれであると思われた。
ヒトPSを産生するHepG2細胞を用い、エストラディオール(E2)の添加による培養上清中のPS分泌量の変動についてELISA解析を行ったところ、30%の発現低下を認めた。また、細胞内PSmRNAの変動についてReal Time PCRを用いて定量した結果、同様にE2の添加によるmRNA発現低下を認めた。現在、PS遺伝子プロモータ領域をクローニングし、ルシフェラーゼ・レポーター解析による、HepG2細胞でのE2によるPS遺伝子発現の制御動態解析を施行中である。

  • Research Products

    (13 results)

All 2008 2007 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (3 results) Book (1 results) Remarks (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Syndecan-4 protects against osteopontin-mediated acute hepatic injury by masking functiona1 domains of osteopontin.2008

    • Author(s)
      S. Kon, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      Thromb Haemost 205

      Pages: 25-33

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mechanism of vitamin D3-induced transcription of phospholipase Dl in HaCat human keratinocytes.2007

    • Author(s)
      R. Kikuchi, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      FEBS Lett 581

      Pages: 1800-1804

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Molecular basis of antithrombin deficiency in four Japanese patients with antithrombin gene abnormalities including two novel mutations.2007

    • Author(s)
      M. Kyotani, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      Am J Hemato1 82

      Pages: 702-705

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] RET signaling-induced SPHKl gene expression plays a role in both GDNF-induced differentiation and MEN2-type oncogenesis2007

    • Author(s)
      M. Murakami, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      J Neurochem 102

      Pages: 1585-1594

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] An Sp1 binding site mutation of the PROSl promoter in a patient with protein S deficiency.2007

    • Author(s)
      N. Sanda, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      Br J Haematol 138

      Pages: 663-665

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A large deletion of the PROSl gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency.2007

    • Author(s)
      T. Yin T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      Thromb Haemost 98

      Pages: 783-789

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Wilms' tumor 1 message and protein expression in bone marrow failure syndrome and acute leukemia.2007

    • Author(s)
      T. Iwasaki, T. Kojima, et. al.
    • Journal Title

      Pathol Int 57

      Pages: 645-651

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Four nove1 causative mutations identified in the PROS1 gene of Japanes o deeP vein thrombosis patients with protein S deficiency.2007

    • Author(s)
      N. Sanda, T. Kojima, et. al.
    • Organizer
      XXIInd Congress of ISTH
    • Place of Presentation
      Geneva, Switzerlamb
    • Year and Date
      2007-07-10
  • [Presentation] The protein S thrombin sensitive region contributes regulation of warfarin treated des-γ-carboxylated protein S secretion: a study of a novel splice site mutation of protein S gene and its molecular Consequences.2007

    • Author(s)
      N. Okada, T. Kojima, et. al.
    • Organizer
      XXIInd Congress of IFTH
    • Place of Presentation
      Geneva, Seitzerlamd
    • Year and Date
      2007-07-09
  • [Presentation] Molecular basis of antithrombin deficiency in four Japanese patients with Pregnancy-associated thrombosis: antithrombin gene abnormalities inc1uding two novel mutations.2007

    • Author(s)
      K. Okumura, T. Kojima, et. al.
    • Organizer
      XXIInd Congress of ISTH
    • Place of Presentation
      Geneva, Switzerlamd
    • Year and Date
      2007-07-09
  • [Book] Xa阻害薬のすべて(抗凝固薬の歴史とXa阻害薬の開発目的を探る)2007

    • Author(s)
      小嶋哲人(池田康夫)
    • Total Pages
      233(8)
    • Publisher
      先端医学社
  • [Remarks]

    • URL

      http://hes.met.nagoya-u.ac.jp/KENSAWEB/labo/blood/bunshi_hp/mutation.html

  • [Patent(Industrial Property Rights)] 血液凝固第VII因子プロモーターの活性化剤及びその利用2007

    • Inventor(s)
      本田 隆 小嶋哲人, ら
    • Industrial Property Rights Holder
      国立大学法人名古屋大学
    • Industrial Property Number
      特願2007-220451
    • Filing Date
      2007-08-27

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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