Elucidation of Molecular basis of inherited and acquired protein S deficiency as a thrombosis risk factor

2008 Fiscal Year Final Research Report

• Project/Area Number: 19590553
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Laboratory medicine
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: KOJIMA Tetsuhito Nagoya University, 医学部・保健学科, 教授 (40161913)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): MATSUSHITA Tadashi 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (30314008) ; TAKAGI Akira 名古屋大学, 医学部(保健学科), 助教 (30135371) ; YAKMAMOTO Koji 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (90362251)
• Project Period (FY): 2007 – 2008
• Keywords: プロテインS(PS)欠損症 / PROS1遺伝子 / 遺伝子欠失 / プロモーター / ルシフェラーゼ・レポーター解析 / HepG2細胞 / エストラディオール(E2) / PS mRNA

Research Abstract

先天性プロテインS(PS)欠損症・異常症の遺伝子解析において、未解析の新たな症例検体については従来のPCRダイレクトシーケンス法を用いた遺伝子変異の同定を行った結果、新規変異を含めてその原因と思われるPROS1遺伝子変異を同定した。その中でPROS1遺伝子の蛋白翻訳領域には変異は見つからなかったものの、翻訳開始点より168bp上流のプロモーター領域に同定したC→T (c.-168C>T)の点突然変異のルシフェラーゼ・レポーター解析の結果、変異型では転写活性が20%まで低下し、先天性PS欠損症の原因と思われた。先天性PS欠損症症例で従来の各エクソンのPCRダイレクトシーケンス法にてPROS1遺伝子に変異の見つからなかった症例において、PROS1遺伝子の15個の各エクソン部に偽遺伝子と区別するPCRプライマーを設定し、Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) 法によってPROS1遺伝子欠失の同定解析を行ったところ、PROS1遺伝子の全欠失を示す症例を1例同定した。しかし、他の多くの症例では欠失を同定できず、遺伝子欠失の頻度はまれであると思われた。ヒトPSを産生するHepG2 細胞を用い、エストラディオール(E2)の添加による培養上清中のPS分泌量の変動についてELISA 解析を行ったところ、30%の発現低下を認めた。また、細胞内PS mRNAの変動についてReal Time PCRを用いて定量した結果、同様にE2 の添加によるmRNA発現低下を認めた。現在、PS遺伝子プロモータ領域をクローニングし、ルシフェラーゼ・レポーター解析による、HepG2細胞でのE2 によるPS遺伝子発現の制御動態解析を施行中である。

Research Products

• [Journal Article] T Murate : Implications of sphingosine kinase 1 expression level for the cellular sphingolipid rheostat: relevance as a marker for daunorubicin sensitivity of leukemia cells (2008)
  • Author(s): S Sobue, S Nemoto, M Murakami, H Ito, A Kimura, S Gao, A Furuhata, A Takagi, T Kojima, M Nakamura, M Ito, M Suzuki, Y Banno, Y Nozawa
  • Journal Title: Int J Hematol 87(3) Pages: 266-275
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of amino acid residues responsible for von Willebrand factor binding to sulfatide by charged-to-alanine-scanning mutagenesis (2008)
  • Author(s): T Nakayama, T Matsushita, K Yamamoto, N Mutsuga, T Kojima, A Katsumi, N Nakao, JE Sadler, T Naoe, H Saito
  • Journal Title: Int J Hematol 87(4) Pages: 363-370
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] L1503R is a member of group I mutation and has dominant-negative effect on secretion of full-length VWF multimers: an analysis of two patients with type 2A von Willebrand disease. (2008)
  • Author(s): T Kashiwagi, T Mstsushita, Y Ito, K Hirashima, N Sanda, Y Fujimori, T Yamada, K Okumura, A Takagi, T Murate, A Katsumi, J Takamatsu, K Yamamoto, T Naoe, T Kojima
  • Journal Title: Haemophilia 14(3) Pages: 556-563
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A neonate with homozygous protein C deficiency with a homozygous Arg178Trp mutation (2008)
  • Author(s): F Ozlu, M Kyotani, E Taskin, K Ozcan, T Kojima, T Matsushita, H Yapicioglu, A Takagi, I Sasmaz, M Satar, and N Narli
  • Journal Title: J Pediatr Hematol Oncol 30 Pages: 608-611
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Molecular Defects Associated with Antithrombin Deficiency and Dilated Cardiomyopathy in a Japanese Patient (2008)
  • Author(s): Y Fujimori, H Okimatsu, T Kashiwagi, N Sanda, K Okumura, A Takagi, K Nagata, T Murate, A Uchida, K Node, H Saito and T Kojima
  • Journal Title: Inter Med. 47(10) Pages: 925-931
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Skewed X chromosome inactivation in fraternal female twins results in moderately severe and mild haemophilia B (2008)
  • Author(s): K Okumura, Y Fujimori, A Takagi, T Murate, M Ozeki, K Yamamoto, A Katsumi, T Matsushita, T Naoe, and T Kojima
  • Journal Title: Haemophilia 14(5) Pages: 1088-1093
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] v-Src oncogene product increases sphingosine kinase 1 expression through mRNA stabilization: alteration of AU-rich element-binding proteins (2008)
  • Author(s): S Sobue, M Murakami, Y Banno, H Ito, A Kimura, S Gao, A Furuhata, A Takagi, T Kojima, M Suzuki, Y Nozawa, T Murate
  • Journal Title: Oncogene 27(46) Pages: 6023-6033
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mutational analysis of SOS1 in acute myeloid eukemia (2008)
  • Author(s): Tanizaki, A Katsumi, H Kiyoi, S unishima, T Iwasaki, Y Ishikawa, M obayashi, A Abe, T Matsushita, T Watanabe, Kojima, K Kaibuchi, S Kojima, T Naoe
  • Journal Title: Int J Hematol 88(4) Pages: 460-462
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prognostic implication and biological roles of RhoH in acute myeloid leukaemia (2008)
  • Author(s): T Iwasaki, A Katsumi, H Kiyoi, R Tanizaki, Y Ishikawa, K Ozeki, M Kobayashi, A Abe, T Matsushita, T Watanabe, M Amano, T Kojima, K Kaibuchi, T Naoe
  • Journal Title: Eur J Haematol 81(6) Pages: 454-60
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mechanism of vitamin D3-induced transcription of phospholipase D1 in HaCat human keratinocytes (2007)
  • Author(s): R Kikuchi, S Sobue, M Murakami, H Ito, A Kimura, T Iwasaki, S Shibayama, A Takagi, T Kojima, M Suzuki, Y Banno, Y Nozawa, T Murate
  • Journal Title: FEBS Lett 581(9) Pages: 1800-1804
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Molecular basis of antithrombin deficiency in four Japanese patients with antithrombin gene abnormalities including two novel mutations (2007)
  • Author(s): M Kyotani, K Okumura, A Takagi, T Murate, K Yamamoto, T Matsushita, M Sugimura, N Kanayama, T Kobayashi, H Saito, T Kojima
  • Journal Title: Am J Hematol 82(2) Pages: 702-705
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] RET signaling-induced SPHK1 gene expression plays a role in both GDNF-induced differentiation and MEN2-type oncogenesis (2007)
  • Author(s): Murakami, M Ichihara, S Sobue, R Kikuchi, H Ito, A Kimura, T Iwasaki, A Takagi, T Kojima, M Takahashi, M Suzuki, Y Banno, Y Nozawa, T Murate1
  • Journal Title: J Neurochem 102(5) Pages: 1585-1594
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] An Sp1 binding site mutation of the PROS1 promoter in a patient with protein S deficiency (2007)
  • Author(s): N Sanda, Y Fujimori, T Kashiwagi, A Takagi, T Murate, E Mizutani, T Matsushita, T Naoe, T Kojima
  • Journal Title: Br J Haematol 138(5) Pages: 663-665
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency (2007)
  • Author(s): T Yin, S Takeshita, Y Sato, T Sakata, Y Shin, S Honda, T Kawasaki, H Tsuji, T Kojima, S Madoiwa, Y Sakata, M Murata, Y Ikeda, T Miyata
  • Journal Title: Thromb Haemost 98(4) Pages: 783-789
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Wilms' tumor 1 message and protein expression in bone marrow failure syndrome and acute leukemia (2007)
  • Author(s): T Iwasaki, C Sugisaki, K Nagata, K Takagi, A Takagi, T Kojima, M Ito, S Nakamura, T Naoe, T Murate
  • Journal Title: Pathol Int 57(10) Pages: 645-651
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Regulatory mechanism of neutral sphingomyelinase 2 gene expression by daJnorubicin in MCF-7 cells (2008)
  • Author(s): H Ito, M Murakami, S Gao, A Furuhata, K Yoshida, Y Tagawa, S Sobue, A Takagi, T Kojima, M Suzuki, Y Banno, Y Nozawa, K Koizumi, T Murate
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] Mutated Ras-induced. Phospholipase D1 transcripton in a human colon adenocarcinoma celt line, DLD-1 (2008)
  • Author(s): S Gao, M Murakami, H Ito, A Furuhata, K Yoshida, Y Tagawa, S Sobue, A Takagi, T Kojima, Y Banno, M Suzuki, Y Nozawa, T Murate
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] ATRA inhibits ceramide kinase transcription through an ATRA-related transcription factor, COU~-TF1, in a human neuroblastoma cell line, SH-SY5Y cells (2008)
  • Author(s): M Murakami, H Ito, S Gao, A Furuhata, K Yoshida, Y Tagawa, S Sobue, A Takagi, T Kojima, M Suzuki, Y Banno, Y Nozawa, T Murate
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] v-SrcによるSPHKl mRNA安定化と発現増強 (2008)
  • Author(s): 祖父江沙矢加、村上真史、坂野喜子、伊藤裕美、高四強、古畑彩子、高木明、小嶋哲人、野澤義則、村手隆、市原正智
  • Organizer: 第31回日本分子生物学会
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2008-12-09
• [Presentation] 先天性凝固第VII 因子欠損症の分子病態解析 (2008)
  • Author(s): 田中亮子、中島大輔、鈴木敦夫、宮脇由理、藤森祐多、山田貴之、奥村薫、勝見章、山本晃士、松下正、高松純樹、高木明、村手隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第31回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2008-11-22
• [Presentation] 女性血友病Aの分子病態解析 (2008)
  • Author(s): 宮脇由理、鈴木敦夫、田中亮子、中島大輔、藤森祐多、山田貴之、奥村 薫、高木明、村手 隆、松下正、高松純樹、小嶋哲人
  • Organizer: 第31回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2008-11-21
• [Presentation] 「抗血栓薬の最近の進歩」関連学会ジョイントシンポジウム (2008)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Organizer: 日本循環器学会 第31回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2008-11-21
• [Presentation] 新規Gr cm pI 変異L1503R のv cm Wi11ebrand病type2A発症における役割 (2008)
  • Author(s): 平島寛司、柏木隆宏、松下正、伊藤康友、高木明、村手隆、勝見章、直江知樹、小嶋哲人
  • Organizer: 第31回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2008-11-21
• [Presentation] 新規Group I 変異L1503R のvonWillebrand 病type 2A発症における役割 (2008)
  • Author(s): 柏木隆宏、松下正、伊藤康友、高木明、村手隆、勝見章、平島寛司、直江知樹、小嶋哲人
  • Organizer: 第70回日本血液学会総会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2008-11-12
• [Presentation] GATA-1, GATA-2 によるWT1発現調節の解析 (2008)
  • Author(s): 古畑彩子、村上真史、高 四強、木村有美、伊藤裕美、高木 明、小嶋哲人、安部明弘、直江知樹、村手 隆
  • Organizer: 第70回日本血液学会総会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2008-10-12
• [Presentation] 日本人の血栓症の遺伝的背景に関する調査研究 (2008)
  • Author(s): 宮田敏行、川崎富夫、辻肇、窓岩清治、坂田洋一、小嶋哲人、村田満、阪田敏幸、竹下聡、小久保喜弘、小亀浩一、岡田裕美、池田康夫
  • Organizer: 第70回日本血液学会総会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2008-10-12
• [Presentation] 日本人における血栓性素因遺伝子変異データベースの作成 (2008)
  • Author(s): 藤森祐多、奥村薫、山田貴之、田中亮子、中島大輔、鈴木敦夫、宮脇由理、村手隆、高木明、小嶋哲人
  • Organizer: 第70回日本血液学会総会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2008-10-12
• [Presentation] シンポジウム2「血栓性素因の病態と診断の進歩」 : 血栓性素因のとしてのAT とPC異常 (2008)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Organizer: 第9回日本検査血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 津
  • Year and Date: 2008-07-26
• [Presentation] 第VIII因子遺伝子のイントロン22逆位解析法-DNAポリメラーゼの比較- (2008)
  • Author(s): 藤森祐多、山田貴之、奥村 薫、田中亮子、中島大輔、鈴木敦夫、宮脇由理、高木明、村手 隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第9回日本検査血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 津
  • Year and Date: 2008-07-26
• [Presentation] 女性血友病Aの1例 (2008)
  • Author(s): 宮脇由理、鈴木敦夫、田中亮子、中島大輔、藤森祐多、山田貴之、奥村薫、高木明、村手 隆、松下正、高松純樹、小嶋哲人
  • Organizer: 第9回愛知県医学検査学会
  • Place of Presentation: 豊橋
  • Year and Date: 2008-05-25
• [Presentation] 先天性プロテインC欠損症7家系における遺伝子解析 (2007)
  • Author(s): 田中亮子、中島大輔、柏木隆宏、三田直美、藤森祐多、山田貴之、奥村薫、勝見章、松下正、山本晃士、高松純樹、高木明、村手隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第30回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 志摩
  • Year and Date: 2007-11-16
• [Presentation] 60歳時からの鼻出血で発症した遺伝性出血性末梢血管拡張症の遺伝子解析 (2007)
  • Author(s): 中島大輔、田中亮子、柏木隆宏、三田直美、藤森祐多、山田貴之、奥村薫、寺西正明、高木明、村手隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第30回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 志摩
  • Year and Date: 2007-11-16
• [Presentation] X染色体の不活性化を伴う女児血友病Bの分子病態解析 (2007)
  • Author(s): 奥村薫、山田貴之、柏木隆宏、三田直美、藤森祐多、田中亮子、中島大輔、松下正、小関道夫、高木明、村手隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第30回日本血栓止血学会学術集会
  • Place of Presentation: 志摩
  • Year and Date: 2007-11-16
• [Presentation] JAK2V617F変異がもたらすBcl-XL発現増加とその転写調節機序の解明 (2007)
  • Author(s): 木村有美、伊藤裕美、祖父江沙矢加、村上真史、根本聡、高四強、古畑彩子、高木明、小嶋哲人、幣光太郎、村手隆
  • Organizer: 第69回日本血液学会・第49回日本臨床血液学会 合同総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2007-10-13
• [Presentation] アンチトロンビン欠損症と拡張型心筋症の合併家系における分子病態解析 (2007)
  • Author(s): 藤森祐多、沖松秀美、柏木隆宏、三田直美、田中亮子、中島大輔、山田貴之、奥村薫、高木明、村手隆、内田文、野出孝一、小嶋哲人
  • Organizer: 第69回日本血液学会・第49回日本臨床血液学会 合同総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2007-10-13
• [Presentation] 白血病細胞株におけるSPHK1発現と抗癌剤Daunorubicin体制との関連 (2007)
  • Author(s): 祖父江沙矢加、村上真史、根本聡、伊藤裕美、木村有美、高四強、古畑彩子、高木明、小嶋哲人、村手隆
  • Organizer: 第69回日本血液学会・第49回日本臨床血液学会 合同総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2007-10-11
• [Presentation] PROS1遺伝子プロモーテー領域内の一塩基置換による先天性プロテインS欠損症 (2007)
  • Author(s): 三田直美、柏木隆宏、藤森祐多、田中亮子、中島大輔、山田貴之、奥村薫、高木明、村手隆、小嶋哲人
  • Organizer: 第8回日本検査血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 福井
  • Year and Date: 2007-07-22
• [Presentation] The protein S thrombin sensitive region contributes regulation of warfarin treated des-γ-carboxylated protein S secretion: a study of a novel splice site mutation of protein S gene and its molecular consequences (2007)
  • Author(s): H. Okada, S. Kunishima, M. Hamaguchi, A. Takagi, K. Yamamoto, J. Takamatsu, T. Matsushita, H. Saito, T. Kojima, T. Yamazak
  • Organizer: XXIInd Congress of ISTH
  • Place of Presentation: Geneva, Switzerland
  • Year and Date: 2007-07-19
• [Presentation] Molecular basis of antithrombin deficiency in four Japanese patients with pregnancy-associated thrombosis : antithrombin gene abnormalities including two novel mutations (2007)
  • Author(s): K. Okumura, Y. Fujimori, T. Kashiwagi, N. Sanda, T. Yamada, A. Takagi, T. Murate, T. Iwasaki, A. Katsumi, K. Yamamoto, T. Matsushita, T. Naoe, H. Saito, T. Kojima
  • Organizer: XXIInd Congress of ISTH, Geneva
  • Place of Presentation: Switzerland
  • Year and Date: 2007-07-11
• [Presentation] Four novel causative mutations identified in the PROS1 gene of Japanese deep vein thrombosis patients with protein S deficiency (2007)
  • Author(s): N. Sanda, Y. Fujimori, T. Kashiwagi, T. Yamada, K. Okumura, A. Takagi, T. Murate, T. Iwasaki, A. Katsumi, K. Yamamoto, T. Matsushita, T. Naoe, H. Saito, T. Kojima
  • Organizer: XXIInd Congress of ISTH
  • Place of Presentation: Geneva, Switzerland
  • Year and Date: 2007-07-10
• [Presentation] One-Third of Japanese patients with deep vein thrombosis carried the genetic mutations in proteins S, C and antithrombin genes: the sub-group study of blood coagulation abnormality the study group of research on measures for intractable diseases in Japan (2007)
  • Author(s): J. Ishikawa, Y. Sato, S. Takeshita, K. Kokame, R. Kimura, S. Honda, T. Kawasaki, E. Suehisa, H. Tsuji, S. Madoiwa, Y. Sakata, T. Kojima, M. Murata, Y. Ikeda, T. Miyata
  • Organizer: XXIInd Congress of ISTH
  • Place of Presentation: Geneva, Switzerland
  • Year and Date: 2007-07-10
• [Presentation] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency (2007)
  • Author(s): T. Yin, S. Takeshita, Y. Sato, T. Sakata, Y. Shin, S. Honda, T. Kawasaki, H. Tsuji, S. T. Kojima, Madoiwa, Y. Sakata, M. Murata, Y. Ikeda, T. Miyata
  • Organizer: XXIInd Congress of ISTH
  • Place of Presentation: Geneva, Switzerland
  • Year and Date: 2007-07-10
• [Book] I.基礎 3.血友病の病態 3)血友病Bの分子病態血友病の基礎と臨床(白幡聡編) (2009)
  • Author(s): 奥村薫、小嶋哲人
  • Total Pages: 52-59
  • Publisher: 医歯ジャーナル社
• [Book] Hypercoagulable States. K. Tanaka, and E.W. Davie, eds; Recent Advances in Thrombosis and Hemostasis (2008)
  • Author(s): T Kojima and H Saito
  • Total Pages: 507-520
  • Publisher: Springer(printed in Japan)
• [Book] In抗凝固薬の適正な使い方(第2版)櫻川信男/上塚芳郎/和田秀夫編Chapter4. その他の抗凝固薬Paragraph1.ヘパリン、低分子量ヘパリン (2008)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Total Pages: 267-284
  • Publisher: 医歯薬出版株式会社
• [Book] In講義録血液・造血器疾患(小澤敬也/直江知樹/坂田洋一編)I.血液・造血器を深く知るための基本講義B.止血・凝固システムを学ぶ凝固系制御機構 (2008)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Total Pages: pp 32-35
  • Publisher: 株式会社メディカルビュー社
• [Book] Part 4. Xa阻害薬の薬理的特徴をみる1. 抗凝固薬の歴史とXa阻害薬の開発目的を探るXa阻害薬のすべて(池田康夫/坂田洋一/丸山征郎(編)) (2007)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Total Pages: 68-75
  • Publisher: 先端医学社
• [Book] 先天性アンチトロンビン欠損症C.血小板・凝固線溶「専門医のための薬物療法Q&A : 血液」(押味和夫/長澤俊郎/小松則夫(編)) (2007)
  • Author(s): 小嶋哲人
  • Total Pages: 359-368
  • Publisher: 中外医学社
• [Book] 先天性血栓性疾患の治療法v.凝固・血小板「EBM血液疾患の治療2008-2009」(押味和夫/別所正美/岡本真一郎/加藤淳(編)) (2007)
  • Author(s): 岩崎年宏, 小嶋哲人
  • Total Pages: 520-526
  • Publisher: 中外医学社
• [Remarks]
  • URL: http://hes.met.nagoya-u.ac.jp/KENSAWEB/labo/blood/index.html
• [Patent(Industrial Property Rights)] 血液凝固第VII 因子プロモーターの活性化剤及びその利用 (2007)
  • Inventor(s): 本多隆、高松純樹、豊田秀徳、山本晃士、後藤秀実、小嶋哲人
  • Industrial Property Rights Holder: 国立大学法人名古屋大学
  • Industrial Property Number: 特願2007 2007-22045
  • Filing Date: 2007-08-27