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2008 Fiscal Year Annual Research Report

海洋細菌が分泌するキチナーゼの修飾糖鎖に関する基礎的研究

Research Project

Project/Area Number 19780163
Research InstitutionNihon University

Principal Investigator

糸井 史朗  Nihon University, 生物資源科学部, 講師 (30385992)

Keywordsキチナーゼ / 海洋細菌 / 糖鎖修飾 / α型結晶キチン / Vibrio proteolyticus
Research Abstract

セルロースに次ぐ莫大なバイオマスであるキチンの有効利用を目指して研究を進める中で、これまでに海洋細菌Vibrio protrolyticusが速やかにα型結晶キチンを分解すること、それが当該海洋細菌の分泌するキチナーゼによること、さらにその一次構造を明らかにしてきた。この海洋細菌由来キチナーゼの大腸菌リコンビナントのSDS-PAGEゲル状の分子量が明らかに理論値よりも大きいことから、何らかの修飾を受けている可能性が高いと考え、研究を進めた。すでに過年度中に、当該リコンビナントタンパク質がWGAを用いるレクチンプロッティングにより陽性反応を示すことを明らかにしたが、当該年度では、さらにConAを用いるレクチンプロッティングを試みるとともに、糖鎖修飾条件の検討および糖鎖修飾部位の絞り込みを試みた。まず、修飾条件の検討であるが、当該リコンビナントはコールドショックにより発現誘導を行う系を用いているが、その発現誘導直前に低温(氷冷)で数時間保持する必要が認められた。発現誘導直前に低温で保持せずに得たリコンビナントでは、WGAおよびConAの陽性反応は認められなかった。ただし、発現誘導直前の低温処理を行ってもWGAおよびConAの陽性反応が観察されなかったり、また、発現タンパク質の回収を極力少ないステップ数で行う必要も認められ、当該修飾が不安定なことが推測された。次に糖鎖修飾部位の絞り込みについては、850アミノ酸からなる当該リコンビナントキチナーゼの一次構造のうち、C末端側250アミノ酸を欠損するリコンビナントを作製し、WGAおよびConAを用いるレクチンプロッティングを試みた。その結果、C末端側欠損リコンビナントでもWGAおよびConAの陽性反応が認められ、この領域中に糖鎖修飾部位が存在する可能性が示唆された。

  • Research Products

    (2 results)

All 2009 2008

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results)

  • [Journal Article] Phenotypic variation in Lactococcus lactis subsp. lactis isolates derived from intestinal tracts of marine and freshwater fishes2009

    • Author(s)
      Shiro Itoi, Kohei Yuasa, Sayaka Washio, Takeshi Abe, Erika Ikuno and Haruo Sugita
    • Journal Title

      J. Appl. Microbiol (印刷中)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Purification, characterization and cloning of Vibrio parahaemolyticus chitinolytic enzymes and application to oligosaccharide production2008

    • Author(s)
      Kazunari Kadokura, Yusuke Sakamoto, Akiko Rokutani, Takanori Ikegami, Takao Hirano, Mahiro Yamamoto, Kaori Saito, Wataru Hakamata, Shiro Itoi, Haruo Sugita, Tadatake Oku and Toshivuki Nishio
    • Journal Title

      J. Appl. Glycosci 2

      Pages: 157-164

    • Peer Reviewed

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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