2021 Fiscal Year Annual Research Report
Comprehensive analysis of Babesia tick-stage antigens: Establishing of a base for development the TBV
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19H03120
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| Research Institution | Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine |
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Principal Investigator |
河津 信一郎 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60312295)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白藤 梨可 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 准教授 (00549909)
麻田 正仁 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 准教授 (40587028)
山岸 潤也 北海道大学, 人獣共通感染症国際共同研究所, 准教授 (80535328)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 獣医学 / 疾病予防・制御 / バベシア / マダニステージ / 遺伝子改変原虫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
バベシアのマダニ体内発育ステージに特異的な細胞表在性蛋白質を網羅的に検出し、伝搬阻止ワクチン（TBV）候補抗原を探索した。【材料と方法】Babesia ovata（三宅株）赤血球内発育ステージ（Blood stage）をin vitro誘導法（PubMed ID: 1549158）によりマダニ体内発育ステージ（Tick stage）へと誘導し、RNA-sequence法（RNA-seq.）を用いてTick stage分子の探索を行った。特徴的な形態が観察され、またRT-PCR法でTick stage遺伝子の発現が確認出来た分画をパーコール密度勾配遠心法で濃縮した。得られた原虫からRNAを抽出し、RNA-seq.に供した。次世代シークエンシング（NGS)でデータを取得し、同時に実施したBlood stage RNA-seq.データとの間で比較解析を行った。【結果】TBV標的に適した細胞外発育ステージに相当する、誘導後6時間のTick stage原虫をRNA-seq.に用いて、分画濃縮法にて、ウシ赤血球が除かれたTick stage原虫分画を精製し、RNA-seq.に供した。Tick stage誘導後6時間では核を１つまたは２つ有し、短い突起を持つray bodyと呼ばれる特徴的な形態が確認された。NGS RNA-seq.データをBlood stage/Tick stage間で比較解析したところ、Blood stageよりも Tick stageで発現量が2倍以上大きい遺伝子は413個あり、特にTick stageにおいて十分な転写産物発現量があると考えられる遺伝子は253個あった。これら遺伝子群から、TBVの候補となる表在性蛋白質遺伝子の同定を行った。結果、Tick stageでの発現量上位50遺伝子中に、原虫の細胞表面に局在していると推定されたタンパク質をコードする14遺伝子を同定した。【結論】原虫の細胞表面に局在していると推定されたタンパク質をコードする遺伝子14個の内、マラリア原虫において、そのオルソログが生存に重要であると考えられている遺伝子（TBV候補抗原遺伝子）として、以下の4つが見いだされた；BOVATA_007670、BOVATA_024940、BOVATA_036750及びBOVATA_038700。
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| Research Progress Status |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] The GP-45 Protein, a Highly Variable Antigen from Babesia bigemina, Contains Conserved B-Cell Epitopes in Geographically Distant Isolates.2022
Author(s)
Mercado-Uriostegui, MA., Castro-Sanchez, LA., Batiha, GE., Valdez-Espinoza, UM., Falcon-Neri, A., Ramos-Aragon, JA., Hernandez-Ortiz, R., Kawazu, SI., Igarashi, I., and Mosqueda, J.
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Journal Title
Pathogens
Volume: 11(5)
Pages: 591
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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