血管内皮増殖因子スプライシングアイソフォームを制御する筋ジストロフィー治療の検証

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K17380
• Research Institution: Hyogo Medical University
• Principal Investigator: 下村 英毅 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (30441273)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 筋ジストロフィー / 血管内皮増殖因子 / スプライシング

Outline of Annual Research Achievements

Duchenne 型筋ジストロフィー（DMD）は、ジストロフィンタンパクの異常に発症する進行性の筋萎縮症であり、2010年頃より本疾患に対する新規治療法の治験が全世界で行われている。しかし、明らかな臨床効果を示した治療法は未だ報告されていない。近年、血管内皮増殖因子（VEGF）のスプライシングアイソフォームの一つであるVEGF-A165aが、本疾患の病態を改善する可能性が報告された。この研究では、VEGFのスプライシングを修正し、スプライシングアイソフォームをVEGF-A165a優位にシフトすることで、新規治療を開発することを目的にする。
2019年度は、過去に筋生検を行ったDuchenne型筋ジストロフィー患者の生検筋、その他の筋疾患症例の生検筋より抽出したRNA、および正常筋由来mRNAを鋳型として、VEGF-Aのスプライシングアイソフォームの発現様式をダイレクトシーケンス法で解析している。現在、症例の蓄積を行っている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

2019年度はまずヒト正常筋由来mRNAを解析し、VEGF-Aのスプライシングアイソフォームの解析を行った。そのうえで、現在筋疾患由来のmRNAの解析を進めている。

Strategy for Future Research Activity

前年度に引き続き、Duchenne型筋ジストロフィーを含めた筋疾患由来mRNAの解析を進める。さらにrealtime RT (reverse transcription)-PCR法により定量的に解析する。正常および各病態におけるアイソフォーム様式を検討することにより、VEGF-A165aなどの各アイソフォームの関与を検証する。
その結果に基づき、AS-oligoによりスプライシングを制御し、VEGF-A165aなどの病態改善に関与するアイソフォーム優位の発現様式にスプライシングをシフトし得ることを以下のように検証する。VEGF-Aの標的となるエクソンあるいは周辺イントロンの塩基配列に対しinsilico解析を行い、スプライシング促進配列と抑制配列を同定するとともに、対応するAS-oligoの作成を進めていく。

Causes of Carryover

理由：当初予定していた試薬を購入するに至らなかったため次年度使用額が生じた。
使用計画：試薬等の購入にあてる予定である。