2019 Fiscal Year Research-status Report
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19K22355
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| Research Institution | Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine |
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Principal Investigator |
福本 晋也 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 准教授 (50376422)
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| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2021-03-31
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| Keywords | マラリア原虫 / ハマダラカ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究計画では哺乳動物・節足動物の両ステージを実験室内で再現可能である、ネズミマラリア原虫-ハマダラカ媒介モデルを用いて、ヴェノムによる殺ベクター型原虫作製を目指す。現在までの研究によりミツバチメリチン遺伝子を外来遺伝子として導入した組換えマラリア原虫の作製・クローニングを行った。この組換え原虫をハマダラカに感染させ、ハマダラカの感染表現型の解析を行った。殺ハマダラカ効果を解析したが、その効果に再現性が認められなかった。メリチン遺伝子の転写量を解析したところ何らかの転写抑制が起きていることが示唆された。そこで、メリチン遺伝子を発現するプロモーターとターミネーターのカセットのユニット変更を行った新たな組換え原虫の作製とクローニングを行い、ハマダラカでの感染実験を行った。その結果、残念ながら転写抑制を解除することが出来なかった。メリチン発現原虫の作製において、転写制御抑制を解除する方法の検証が重要であることが示唆された。一方、メリチン発現マラリア原虫のマウスへの感染性は野生型と比較し大きく低下することが明らかとなった。この結果は、外来遺伝子導入によるマラリア原虫スポロゾイト不活化法の開発へと応用できる可能性が示唆された。
次にメリチン以外のヴェノムペプチドの発現検証を行った。サソリ由来毒素のTF2を発現する組換えマラリア原虫の作製を試みた。TF2遺伝子の人口合成を行い、マラリア原虫シグナルペプチドとの融合型でハマダラカステージ特異的に発現するトランスファーベクターコンストラクトの作製した。このコンストラクトを導入した組換えマラリア原虫の作出を試みた。その結果、サソリ毒素TF2遺伝子発現カセットを保有する組換えマラリア原虫の作製、クローニングに成功した。今後この原虫のハマダラカ感染表現型を解析する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
毒素遺伝子の導入には成功したが、ベクターステージでそれを発現させる際に予想外の転写抑制制御が起こることが確認されたため。この抑制制御は発現カセットを変更しても解除出来なかった。しかしながら、この転写制御機構を明らかにすることで、マラリア原虫について基礎生物学的知見を付与できるのではないかと考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
次世代シーケンサーを用いた解析により、どのような転写抑制制御がおきているのかを解析する。またサソリ毒TF2導入マラリア原虫のハマダラカ感染表現型の解析を行う。
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| Causes of Carryover |
転写制御が発生することが明らかとなったため、その解析に時間を要したため次年度使用額が生じた。今後より詳細な解析を行うための人件費、外部委託費、消耗品費等に使用する計画である。
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