2020 Fiscal Year Annual Research Report
内在性ＵＴＲブロッカーによるＣＣＮ２遺伝子発現制御とその生物学的意義
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19K22716
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
久保田 聡 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (90221936)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西田 崇 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (30322233)
服部 高子 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (00228488)
高江洲 かずみ (河田かずみ) 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (10457228)
滝川 正春 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (20112063)
青山 絵理子 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (10432650)
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| Project Period (FY) |
2019-06-28 – 2021-03-31
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| Keywords | CCN2 / lncRNA / antisense RNA / gene regulation / skeletal development |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の対象は、ヒトCCN2の3'-非翻訳領域 (UTR) を覆うアンチセンス長鎖ノンコーディングRNA (lncRNA) anti-CCN2 3'-UTR RNA (ACUR)である。前年度までの研究でACURのヒト細胞での発現は、子宮頸癌細胞HeLaと軟骨肉腫細胞HCS-2/3、乳がん細胞MDA-MB-231株および膝関節から分離した関節軟骨細胞で確認できていた。一方マウス細胞においては、昨年度C3H10T1/2細胞株においてACURが転写されていることは確認できていた。これに続いて本年度は、マウス軟骨前駆細胞株ATDC5を用いて軟骨細胞におけるACURの発現と、その分化に伴う変動の解析に進んだ。その結果分化誘導前のATDC5細胞では弱いACURの発現が見られたが、分化に伴い発現が上昇した。この発現変動パターンはII型コラーゲンなどの軟骨細胞分化マーカーと同じであり、ACURの軟骨細胞分化に対する関与が強く示唆された。現在これに続いてACURを特異的にノックダウンするGapmeRを用いた機能解析に進んでいる。またACURの分子機能の解析に関しては、提案当初の仮説である3'-UTR 封鎖機能を前年度検証し、仮説を支持するような結果が得られなかったため、研究戦略の再検討を行った。その一環のデータベース解析によりヒトCCN2遺伝子座からはhsa-circ-0077863, 0077864の二つのcirRNAが出力され、これらがACURと結合しうることが明らかになった。現在これらcircRNAの発現状況の確認に着手している。
なお昨年度新たに発見した、ACURとは別のアンチセンスlncRNAについては、ヒト軟骨細胞にほぼ発現のないことを確認した一方、データベース解析ではこのRNAがヒト間葉系幹細胞に発現していることを見出した。ACURとは別の段階での骨格形成への関与が疑われる。
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