Identification of salivary citrullination-related substances using salivaomic analysis

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K24107
• Research Institution: Kanagawa Dental College
• Principal Investigator: 坂口 和歌子 神奈川歯科大学, 大学院歯学研究科, 助教 (50420972)
• Project Period (FY): 2019-08-30 – 2021-03-31
• Keywords: 関節リウマチ（RA） / サリバオミックス / A1AT / 抗CCP抗体

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、唾液中からシトルリン化されたタンパクおよび関連物質を検出し、サリバオミックス解析によって得られた唾液代謝マッピングにより関節リウマチ（RA）の病態メカニズムを解明することを目的としている。これにより唾液による新しい診断基盤を構築し、この結果によって将来的に、唾液による簡易検出法の開発をすることを目指している。
予備実験の結果をもとに研究のデザインを構築し、2020年度もⅡ型コラーゲンを投与した関節炎モデルマウスであるDBAマウスを用いて研究を行った。マウスの唾液、血清、足関節を採取し、Western blottingでは血液、唾液、足関節の46kDaの部位にバンドが強く出現した。そのゲル片を用いて、プロテオーム解析を実施しタンパクの同定を行った。その結果から、免疫染色でシトルリン化部位の確認やELISAを行い、タンパクの定量を行った。動物実験の段階では、唾液中からシトルリン化したA1ATおよび抗CCP抗体が検出された。A1ATは炎症などで血中濃度が上がるとされているが、シトルリン化したA1ATを検出したのは新たな発見であると思われ、タンパクのシトルリン化にA1ATが関与している可能性が示唆された。抗CCP抗体とA1ATによる免疫染色で重度RAモデルマウスの関節滑膜に強い陽性シグナルを認め炎症細胞の浸潤、関節の破壊を認めたことから、関節滑膜タンパクのシトルリン化は関節滑膜で起こり、血中、唾液中へ流出したと考えられた。この結果を論文にまとめ、現在投稿中である。