2009 Fiscal Year Annual Research Report
ニワトリ細胞株DT40の遺伝子破壊による、DNA損傷への応答機構の網羅的解析
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20241012
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
武田 俊一 Kyoto University, 医学研究科, 教授 (60188191)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
茂木 章 京都大学, 医学研究科, 助教 (80452332)
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| Keywords | DNA組み換え / 標的組み換え / 遺伝子治療 / DT40 / ニワトリBリンパ細胞 |
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| Research Abstract |
(1)CTIPの機能解析
CTIPは、BRCA1(家族性乳がん原因遺伝子で相同組み換えに関与)と結合する。CTIP完全欠損細胞とBRCA1と結合できないCTIP S332A発現細胞とを作った。そしてCTIPが、BRCA1依存的およびBRCA1非依存的に機能するDNA修復をそれぞれ解明することを試みた。以下の2点を解明した:(i)CTIPがBRCA1非依存的に相同組換えの最初のステップに機能する。(ii)CTIPがBRCA1依存的に、トポイソメラーゼポイズンと呼ばれる抗がん治療薬によって生じた2重鎖切断(切断端にトポイソメラーゼが共有結合)を修復するのに特異的に関与(共有結合したポリペプチドを除去)する。この研究成果は、PLoS Geneticsに発表した。
(2)SSB1とSSB2の機能解析
SSB1-/-細胞とSSB2-/-細胞とをそれぞれ作製した。これからSSB1-/-/SSB2-/-2重遺伝子破壊細胞を作製する予定である。
(3)相同組み換えにおける、ヒストン修飾の機能解析
UBC13(E2)と共同して働くE3ユビキチンリガーゼの1つが、RNF168であることを明らかにした。
(4)新規のRad51活性の制御因子の機能解析
我々は、Rad51制御因子全部(BRCA1, BRCA2, FANC genes, PALB-2, RAD51 paralog genes(ex.XRCC3), RAD52, SFR1, SWS1)の各遺伝子破壊細胞を作った。さらにBRCA2欠損細胞において、各Rad51制御因子を遺伝子破壊した。
(5)標的組み換えに関与するDNAポリメラーゼの同定
複製ポリメラーゼδは、4種類のタンパク分子から構成される。このうちp66と呼ばれるタンパク分子の遺伝子破壊細胞を作った。この破壊細胞は、相同組換えが低下していなかった。
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[Journal Article] Collaborative action of Brcal and CtIP in elimination of covalent modifications from double-strand breaks to facilitate subsequent break repair.2010
Author(s)
Nakamura K, Kogame T, Oshiumi H, Shinohare A, Sumitomo Y, Agama K, Pommier Y, Tsutsui KM, Tsutsui K, Hartsuiker E, Ogi T, Takeda S, Taniguchi Y.
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Journal Title
PLoS Genet. VOL.6
Pages: e1000828
Peer Reviewed
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