2009 Fiscal Year Annual Research Report
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20390304
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
秋山 真志 Hokkaido University, 大学院・医学研究科, 准教授 (60222551)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清水 宏 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (00146672)
阿部 理一郎 北海道大学, 大学病院, 講師 (60344511)
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| Keywords | 遺伝子 / 角化 / 魚鱗癬 / 胎児治療 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、道化師様魚鱗癬患者由来培養表皮幹細胞、ならびに、ABCA12ノックアウトマウス由来培養表紙幹細胞に、正常ABCA12遺伝子を導入し、それらの細胞から表皮、毛包を再生することにより、ABCA12遺伝子変異による重症魚鱗癬の遺伝子治療の方法論を確立すること、また、正常ABCA12遺伝子を、liposome法、naked DNA法等を用いて導入することにより、魚鱗癬病変の表現形の改善を行うことである。具体的には本年度は以下の研究計画を施行した。
1)再構成魚鱗癬病変に対する遺伝子導入による治療実験
正常ABCA12遺伝子を、免疫不全マウス背部に患者由来表皮細胞から再構成した魚鱗癬皮膚病変に導入した。導入された再構成病変について、経時的に皮膚生検を施行、凍結切片を作成、蛍光顕微鏡等にて観察することにより、正常ABCA12遺伝子の導入、発現を確認した。さらに、免疫組織学的、in situ hybridization法、ノザン・ブロッティング、サザン・ブロッティングによって、再構成患者表皮における導入正常遺伝子および蛋白の発現をモニターした。遺伝子導入実験後、再構成皮膚における臨床症状の改善度を評価した。さらに可能な限り長期にわたり、遺伝子導入部を経時的に観察し、導入遺伝子の発現の持続時間、遺伝子導入による諸効果の持続時間を算定した。ここでは、導入遺伝子による副作用も評価する。
2)ABCA12ノックアウトマウス(魚鱗癬モデルマウス)新生児に対する正常ABCA12遺伝子導入による治療実験
上記計画1)同様に、前年度作成したリポーター遺伝子、ならびに、正常ABCA12遺伝子を、ABCA12ノックアウトマウス新生児の皮膚に導入し、その表現形の改善を目指した。遺伝子治療効果は、罹患新生児の生命予後を評価するとともに、経時的に皮膚生検を施行、ABCA12遺伝子の発現を確認した。さらに、電子顕微鏡的観察など、形態学的に表現形の改善を評価した。
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