レトロウイルス発現系を用いた発癌関連miRNAの探索

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20659151
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 野阪 哲哉 三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30218309)
• Keywords: miRNA / microRNA / レトロウイルスベクター / 発癌 / 造血細胞腫瘍

Research Abstract

当研究の目的は、遺伝子発現効率の良いレトロウイルス発現系を用いて、主に造血器腫瘍に関与するマウスmicroRNA(miRNA)を同定し、新規の発癌分子機構を明らかにするとともに、新たな治療法の開発に応用することである。
我々はまず、MLL(Mixed Lineage Leukemia)関連白血病の癌化に関連するようなmiRNAの探索から開始した。最初に、4-hydroxytamoxifen(4-HT)の除去によりMLL-ENL(-Estrogen Receptor(ER))の作用を消失させた時に、造血細胞において発現レベルが変化するmiRNAをmicroarrayにて探索した。その結果、miR-XXX(未発表データ)の発現上昇が観察され、real time PCR法にて、確認した。miR-XXX自体は癌抑制遺伝子的に働いている可能性が考えられる。即ち、癌遺伝子的に働く遺伝子の発現を抑える遺伝子である可能性が高い。次に、MLL-ENLでtransformした細胞におけるmiR-XXXの強発現や、造血細胞におけるmiR-XXXのノックダウンの表現型を解析し、その標的遺伝子を明らかにする目的で、U6プロモーターを用いた、shRNA発現用のレトロウイルスself-inactivationベクターを構築した。現在、miR-XXXの機能解析を行い、引き続き、他のmiRNAの探索・機能解析も行っている。上記shRNA発現用レトロウイルスベクターは初代培養細胞などで特定の遺伝子を手軽に恒常的にノックダウンさせ、当該遺伝子機能を解析する際にも役立つ。実際、純化した造血幹細胞を用いて、それらの細胞において特異的に発現している遺伝子を複数同定したが(未発表データ)、それらをノックダウンすることにより、造血幹細胞における癌遺伝子発現による癌化が部分的に抑制されることが判明した。
miRNAを含めた統合的遺伝子機能解析が造血器腫瘍発生機構の解明にとって重要である。

Research Products

• [Journal Article] Human parainfluenza virus type 2 L protein regions required for interaction with other viral proteins and mRNA capping. (2011)
  • Author(s): Nishio M, Tsurudome M, Garcin D, Komada H, Ito M, Le Mercier P, Nosaka T, Kolakofsky D.
  • Journal Title: J Virol Volume: 85 Pages: 725-732
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of domains on the fusion (F) protein trimer that influence the hemagglutinin-neuraminidase specificity of the F protein in mediating cell-cell fusion. (2011)
  • Author(s): Tsurudome M, Ito M, Nishio M, Nakahashi M, Kawano M, Komada H, Nosaka T, Ito Y.
  • Journal Title: J Virol Volume: (印刷中)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression of ADAMTS4 in Ewing's sarcoma. (2010)
  • Author(s): Minobe K, Ono R, Matsumine A, Shibata-Minoshima F, Izawa K, Oki T, Kitaura J, Iino T, Takita J, Iwamoto S, Hori H, Komada Y, Uchida A, Hayashi Y, Kitamura T, Nosaka T.
  • Journal Title: Int J Oncol Volume: 37 Pages: 569-581
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Cv2, functioning as a pro-BMP factor via twisted gastrulation, is required for early development of nephron precursors. (2010)
  • Author(s): Ikeya M, Fukushima K, Kawada M, Onishi S, Furuta Y, Yonemura S, Kitamura T, Nosaka T, Sasai Y.
  • Journal Title: Dev Biol Volume: 337 Pages: 405-414
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] MLL融合遺伝子による白血病発症機構 (2010)
  • Author(s): 野阪哲哉、小埜良一
  • Journal Title: 血液・腫瘍科 Volume: 61(2) Pages: 217-223
• [Presentation] Differential role of myeloid transcription factors, C/EBPα and PU.1 in leukemogenesis by MLL-fusion oncogenes (2010)
  • Author(s): Fukuchi Y, Kuroda K, Sadahira K, Ono R, Tenen DG, Kitamura T, Nosaka T, Okamaoto S, Nakajima H.
  • Organizer: 第52回アメリカ血液学会
  • Place of Presentation: Orlando, FL, USA
  • Year and Date: 2010-12-04
• [Presentation] ヒトパラインフルエンザ2型ウイルス(hPIV2)L蛋白の転写能に必須であるアミノ酸の同定 (2010)
  • Author(s): 西尾真智子、鶴留雅人、野阪哲哉
  • Organizer: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 徳島
  • Year and Date: 2010-11-08
• [Presentation] パラインフルエンザウイルスの膜融合誘導における受容体結合蛋白と膜融合蛋白の相互作用 (2010)
  • Author(s): 鶴留雅人、西尾真智子、伊藤守弘、河野光雄、野阪哲哉、駒田洋、伊藤康彦
  • Organizer: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 徳島
  • Year and Date: 2010-11-08
• [Presentation] Ikaros isoform 6 enhances proliferative effect by BCR-ABL1 in human CD34+ hematopoietic cells (2010)
  • Author(s): Suzuki K, Ono R, Ohishi K, Kataoka I, Masuya M, Hamada H, Kitamura T, Katayama N, Nosaka T.
  • Organizer: 第72回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2010-09-26
• [Presentation] Differential role of C/EBPα and PU.1 in leukemogenesis by MLL-fusion oncogenes (2010)
  • Author(s): Fukuchi Y, Kuroda K, Sadahira K, Ono R, Ikeda Y, Kitamura T, Nosaka T, Okamaoto S, Nakajima H.
  • Organizer: 第72回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2010-09-24
• [Presentation] Analysis of novel molecular mechanism in transformation by MLL-ENL targeting long-term hematopoietic stem cells. (2010)
  • Author(s): Ono R, Masuya M, Nakajima H, Enomoto Y, Miyata E, Kamisako T, Ito M, Suzuki K, Katayama N, Kitamura T, Nosaka T.
  • Organizer: 第69回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2010-09-22
• [Remarks]
  • URL: http://www.medic.mie-u.ac.jp/microbiol/