2022 Fiscal Year Research-status Report
創傷治癒過程における皮膚創部の酸化ストレス耐性獲得機構の解明
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20K09856
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
河合 建一郎 兵庫医科大学, 医学部, 准教授 (80423177)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久保 盾貴 大阪大学, 大学院医学系研究科, 教授 (00362707)
藤原 敏宏 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (00423179)
西本 聡 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (30281124)
石瀬 久子 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (30567194)
垣淵 正男 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (50252664)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 創傷治癒 / TRPC3 / NFAT / Endothelin Receptor B / 機械的刺激 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では酸化ストレスに応答するメカニズムとして、Ca2+チャネルの一種であるTRPC3に着目し、皮膚線維芽細胞がTRPC3を介して組織における酸化ストレスに感応して酸化ストレス耐性を獲得することで組織修復へ導くメカニズムを解明することを目標としていた。
レトロウィルスを用いたTRPC3過剰発現細胞およびそのコントロール細胞は作成しストック済みであったため本研究ではこれに加えてCRISPR Cas9システムを用いてTRPC3ノックアウト細胞を作成し、各種assayを行う計画となっていた。
しかしながらCRISPR Cas9システムを用いたTRPC3ノックアウト線維芽細胞がどうしてもうまくできなかった。
このため、研究最終年度でもあることからある程度研究の方向性を修正し、これまでに得ていた創傷治癒におけるTRPC3の役割についての知見について掘り下げて研究を行い、成果を出すことに目標を変更した。具体的には、TRPC3関連のパイロット研究で得ていた機械的刺激時における線維芽細胞と表皮細胞との相互作用について調査を行い論文作成を行った。機械的伸展刺激によって表皮細胞から分泌されるEndothelineが増加するが、一方で機械的伸展刺激によって線維芽細胞においてはEndothelin受容体の発現が増加する。Endotheline受容体にEndothelineが結合するとG蛋白などを介してTRPC3が活性化され、カルシウムの細胞内への流入が増加し、転写因子のNFATを介して創の線維化を促す遺伝子発現が上昇する。以上のメカニズムを研究し論文作成を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究以外の業務が増加したことに加え、研究を進めるにあたって必要なTRPC3ノックアウト線維芽細胞がどうしても作れなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
創傷治癒メカニズムにおけるTRPC3の役割として酸化ストレス受容体としての研究を行う予定であったが、TRPC3ノックアウト線維芽細胞の作成ができなかったことから、当初の方向性（酸化ストレス受容体としてのTRPC3研究）の研究は困難となった。今後は同じくTRPC3の創傷治癒過程における役割として、これまでに培っている機械的刺激受容体としてのTRPC3研究について深化させまとめる。
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| Causes of Carryover |
TRPC3ノックアウト線維芽細胞が作成できず、当初の計画通りに研究を行うことが困難となり、TRPC3の創傷治癒メカニズムにおける役割の解明という基本テーマは変えないものの、酸化ストレス受容体ではなく機械的伸展刺激受容体としてのTRPC3の研究に方向性を修正した。2022年度は研究最終年度ということもありそこまでの実験成果にて一旦論文を作成し受理された。しかしながらTRPC3の創傷治癒過程における役割をさらに明らかにしてまとめるため2023年度に追加実験や論文作成する予定である。
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