2021 Fiscal Year Research-status Report
コラゲナーゼ表面処理を行った微細加工軟骨の性状が軟骨再生に及ぼす影響
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20K18425
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
伊谷 善仁 近畿大学, 医学部, 講師 (70510973)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 軟骨再生 / コラゲナーゼ処理 / 微細加工 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和三年度は以下の実験を進めた。
実験：軟骨再生におけるコラゲナーゼ処理の有用性と至適コラゲナーゼ処理時間
移植10週目の標本を採取し、各群におけるサフラニンO陽性断面積から再生軟骨量を算出し、比較検討した。その結果、コラゲナーゼ未処理群の再生軟骨量は、本来の軟骨に比較して、約2.5倍増加していた。一方, 15分群、60分群、および120分群の再生軟骨量は、約4倍増加していた。
各実験群における再生軟骨の接着因子、細胞増殖、および分化を評価する目的で免疫染色をおこなった。フィブロネクチン発現を検討した結果、15分群および60分群のマイクロ軟骨周辺部に一致して、フィブロネクチン発現が亢進し、軟骨再生に寄与している機序が示唆された。一方、未処理群では、フィブロネクチン発現は著明に減弱し、120分群では発現が認められなかった。次に細胞増殖マーカーとして選択したKi67の発現を検討した。その結果、未処理群、15分群および60分群のマイクロ軟骨および周辺の再生軟骨領域において、Ki67陽性細胞が観察された。一方、120分群においては、マイクロ軟骨内のKi67陽性細胞は観察されなかったが、再生軟骨領域のみにKi67陽性細胞が認められた。さらに軟骨分化因子であるSOX5の発現を検討した。その結果、60分群において、マイクロ軟骨周囲の再生軟骨領域に数多くのSOX5陽性細胞が観察された。未処理群および120分群では, SOX5陽性細胞が観察されなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
おおむね実験計画通り進捗している。実験３はすでに埋植は終了しており、今後埋植した組織の取り出しおよび組織の評価を行っていく予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和４年度は自家組織モデルに埋植した組織の取り出しを予定しており、組織標本の検討及び評価を行っていく予定である。実験3では、実験2と同様に、コラゲナーゼを用いてマイクロ軟骨の表面処理を行う。その後マイクロ軟骨をPBSにて洗浄(15分)し, 複合型吸収性ポリマーに播種する。実験群として、播種するマイクロ軟骨量の異なる4群(50, 25, 12.5, 8%)を設定している。作製したマイクロ軟骨・複合型吸収性ポリマーの複合体は、前述のサイトカイン (bFGF-DDS)と組み合わせて自家移植し、１０週後取り出し、組織の評価を予定している。
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| Causes of Carryover |
令和４年度に計画を予定している動物実験のために、イヌを購入予定であり、その費用の予定である。
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