2020 Fiscal Year Research-status Report
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20K18575
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
岩脇 有軌 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学域), 助教 (10754624)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | microRNA / 骨芽細胞 / 骨質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
インプラント治療において、オッセオインテグレーションの獲得または維持には骨量や骨密度が関与していることが知られており、近年それに加えて骨質の重要性が注目されている。骨質についての研究は広く行われているが、その全ての分子機序が解明されているとはいえない。一方で、エピジェネティクス機構の一つであるmicroRNA（miRNA）の遺伝子発現調節は様々な生命現象に関与しており、骨組織においても骨リモデリング等に関連している。本研究では、miRNAが骨質へ影響を与えるシグナル分子の一つであることを検証し、骨質評価の指標または薬剤標的としてのmiRNAの可能性を探ることを目的としている。
今回は、まず過去の文献でlysyl oxidase（LOX）に影響を与えると報告のあるβ-AminopropionitrileおよびDL-Homocysteineを分化培地にて100μM、400μM、1mMの濃度溶液に調整した。骨芽細胞様細胞（MC3T3－E1）を24 well dish に2.5×10^3播種し、通常培地にて24時間培養後、各濃度の分化培地上にて24時間、48時間、72時間、10日間培養し、MTT Assayにて細胞増殖への影響を検討した。24時間～72時間における細胞増殖にはほとんど変化は認められなかったが、10日間での培養では両試薬とも1mMの濃度で細胞増殖が抑制された。
また、6 well dish に1.0×10^5ずつMC3T3－E1播種し、各濃度溶液または分化培地上でCompressive Forceを加え培養したMC3T3－E1を7日および14日でアリザリンレッド染色及び石灰化物の染色を行った。7日と比較し14日ではアリザリンレッド染色が濃くなったが各条件間での違いはなかった。Compressive Forceを加え培養したものは細胞死を起こすものが存在した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
LOXはコラーゲン線維の架橋を促進することが報告されており、現在はmicroRNAのマイクロアレイ解析を行うための条件設定として、LOXを発現低下させた際のMC3T3－E1のフェノタイプへの影響について細胞増殖および細胞分化について検討している。細胞増殖については現条件での評価も可能であるが細胞分化については今年度の研究では変化を認めなかったため更なる検討が必要となった。また、Compressive Forceを負荷させた際のフェノタイプへの影響についても更なる検討が必要であると考える。これより今年度も引き続きMC3T3－E1のフェノタイプへの影響について十分検討し評価してから次の検討項目に進む予定としている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、さらに条件を変えMC3T3－E1のフェノタイプへの影響について検討する。その後、培養したMC3T3－E1におけるmiRNA発現についての網羅的解析を行い、発現変動が認められたmiRNAについてはRT-qPCRによって発現変動の確認を行う。その後、マイクロアレイ、RT-qPCRの両者で発現変動が認められたmiRNAの標的遺伝子候補をmiRDBやTarget Scanなどのデータベースを用いて検索・予測していく予定である。
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| Causes of Carryover |
現在の進歩状況においては既存の試薬や消耗物品を使用できたため次年度使用額が生じた。本年度行う予定の検討項目ではマイクロアレイなどにおいて高額な試薬等が必要となってくるため、その費用として使用する予定となっている。
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