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2010 Fiscal Year Annual Research Report

貧栄養環境下で芳香族環境汚染物質を分解する新規光合成微生物の改良と展開

Research Project

Project/Area Number 21241019
Research InstitutionIbaraki University

Principal Investigator

木村 成伸  茨城大学, 工学部, 教授 (90291608)

Keywordsバイオレメディエーション / シアノバクテリア / ビフェニル / PCB / ダイオキシン / 環境浄化 / 電子伝達系 / 光合成
Research Abstract

土壌中など、環境中に低濃度で広く残留している難分解性環境汚染物質であるPCBやダイオキシン類等の芳香族化合物の分解・除去には、微生物を用いたバイオレメディエーション(生物的環境浄化)が有望な方法であるが、貧栄養環境下では分解効率が低い。この問題を解決するために、NADH特異的な芳香族化合物分解代謝系をNADPH依存的に改変してシアノバクテリア(ラン藻)に組み込み、光合成系で多量に生産されるNADPHを利用して貧栄養環境下での効率的な汚染物質分解を行うための基盤技術研究を進めている。H22年度は次の成果を得た。
1.シアノバクテリアSynechocystis PCC6803細胞中でのBphA3への電子供給経路を同定するために大腸菌を用いた遺伝子スクリーニング系を構築し、BphA4への電子供給タンパク遺伝子の同定を開始した。シアノバクテリアの植物型フェレドキシン還元酵素(FNR)がBphA3を還元することを明らかにした。
2.BphA1~A3に加え、Bph B,C,D遺伝子を導入したシアノバクテリア株を作製し、ビフェニルを安息香酸まで分解できることを明らかにした。これにより、バイオレメディエーション分野でのシアノバクテリアの有用性を確認した。
3.NADH結合部位のわずか3残基のアミノ酸残基置換で基質特異性が約20万倍逆転した高活性BphA4変異体(E175C/T176R/Q177G;CRG変異体)の特異性変化を解析し、(1)3残基の置換効果がほぼ独立的であること、(2)E175C変異がNADHによる還元速度を低下させること、(3)T176R変異がNADPHによる還元速度を増加させることを明らかにした。この知見は、酵素分子、特にBphA4と相同性の高いフェレドキシン還元酵素ファミリーのピリジンヌクレオチドに対する基質特異性の人為的変換を行う上で重要である。

  • Research Products

    (11 results)

All 2010 Other

All Presentation (9 results) Remarks (2 results)

  • [Presentation] 貧栄養環境下で芳香族化合物を分解できる新規光合成微生物2010

    • Author(s)
      西澤明人, 中山実樹, 千田美紀, 千田俊哉, 菓子野康浩, 福田雅夫
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会(BMB2010)
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(神戸市)
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] ビフェニル分解性シアノバクテリアSynechocystis sp.PCC6803株細胞内でのBphA3への電子伝達経路の探索2010

    • Author(s)
      中山実樹, 西澤明人, 千田美紀, 千田俊哉, 菓子野康浩, 福田雅夫
    • Organizer
      第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会(BMB2010)
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(神戸市)
    • Year and Date
      2010-12-09
  • [Presentation] Ribosome-binding site interference caused by Shine-Dalgerno-like nucleotide sequences in Escherichia coli cells2010

    • Author(s)
      Akito Nishizawa, Miki Nakayama, Takuya Uemura, Yoshiyuki Fukuda, Shigenobu Kimura
    • Organizer
      The 6th International Student Conference at Ibaraki University (ISCIU6)
    • Place of Presentation
      Ibaraki University Satellite Room, Mito, Ibaraki, Japan
    • Year and Date
      2010-11-13
  • [Presentation] Effects of Thr^<176> substitutions in BphA4 derived from Acidovorax sp.strain KKS102 on the NADPH/NADH-specificity2010

    • Author(s)
      Keisuke Sugiyama, Akito Nishizawa, Miki Senda, Toshiya SendaMasao Fukuda, Shigenobu Kimura
    • Organizer
      The 6th International Student Conference at Ibaraki University(ISCIU6)
    • Place of Presentation
      Ibaraki University Satellite Room, Mito, Ibaraki, Japan
    • Year and Date
      2010-11-13
  • [Presentation] シアノバクテリアSynechocystis sp.PCC6803株細胞内におけるBphA3への電子伝達経路の探索2010

    • Author(s)
      中山実樹, 西澤明人, 浅井翔太, 千田美紀, 千田俊哉, 菓子野康浩, 福田雅夫, 木村成伸
    • Organizer
      第21回日本化学会関東支部茨城地区研究交流会
    • Place of Presentation
      多賀市民会館(日立市)
    • Year and Date
      2010-11-05
  • [Presentation] AcodovoraxKK$ : S102株由来BphA3のGlu^<175>, Thr^<l76>, Gln^<177>, の置換の組み合わせがNADPH/NADH特異性の変化に及ぼす影響2010

    • Author(s)
      杉W敬亮, 西澤明人, 千田美紀, 千田俊哉, 福田雅夫, 木村成伸
    • Organizer
      第21回日本化学会関東支部茨城地区研究交流会
    • Place of Presentation
      多賀市民会館(日立市)
    • Year and Date
      2010-11-05
  • [Presentation] フェレドキシン還元酵素BphA4のpHに依存した構造変化の違い2010

    • Author(s)
      千田美紀、西澤明人、木村成伸、福田雅夫、石田哲夫、千田俊哉
    • Organizer
      第10回日本蛋白質科学会年会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(札幌市)
    • Year and Date
      2010-06-18
  • [Presentation] Acidovorax sp.KKS102株由来BphA4のThr^<176>置換がNADPHINADH特異性に及ぼす影響2010

    • Author(s)
      杉山敬亮、西澤明人、千田美紀、千田俊哉、福田雅夫、木村成伸
    • Organizer
      第10回日本蛋白質科学会年会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(札幌市)
    • Year and Date
      2010-06-17
  • [Presentation] Synechocystis sp.PCC6803株由来フェレドキシン還元酵素によるBphA3の還元2010

    • Author(s)
      中山実樹、西澤明人、浅井翔太、千田美紀、千田俊哉、菓子野康浩、福田雅夫、木村成伸
    • Organizer
      第10回日本蛋白質科学会年会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(札幌市)
    • Year and Date
      2010-06-17
  • [Remarks]

    • URL

      http://info.ibaraki.ac.jp/scripts/websearch/index.htm

  • [Remarks]

    • URL

      http://www.biochem.ibaraki.ac.jp/05_kimura.html

URL: 

Published: 2012-07-19  

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